Question

12．根据基因工程的有关知识回答下列问题．
（1）利用PCR技术扩增目的基因时，需要加入两种引物，原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链，用两种引物才能确保DNA两条链同时被扩增，引物I延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列的DNA序列，一个DNA分子三轮复制以后，含有两种引物的DNA分子有6个．
（2）基因工程的核心步骤是构建基因表达载体．其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，表达和发挥作用，并可遗传给下代．
（3）大肠杆菌作为受体细胞最常用的转化方法是：首先用Ca²⁺处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞．
（4）检测目的基因是否发挥功能作用的第一步是目的基因是否能转录形成mRNA．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）利用PCR技术扩增目的基因时，由于DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链，因此要用两种引物才能确保DNA两条链同时被扩增；引物I延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列；一个DNA分子三轮复制以后，含有两种引物的DNA分子有2³-2=6个．
（2）基因工程的核心步骤是构建基因表达载体，其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，表达和发挥作用，并可遗传给下代．
（3）将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用Ca²⁺处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞．
（4）检测目的基因是否发挥功能作用的第一步是目的基因是否能转录形成mRNA．
故答案为：
（1）DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链，用两种引物才能确保DNA两条链同时被扩增      处于两个引物之间       6
（2）构建基因表达载体       稳定存在，表达和发挥作用
（3）感受态
（4）目的基因是否能转录形成mRNA

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理、操作工具及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．