研究人员将人工丝蛋白基因导入到蚕卵内.对蚕卵的基因改造获得成功．含有人工丝蛋白的蚕茧发出绿色荧光.比正常的蚕茧更加轻薄．请回答下列问题:(1)进行转基因操作前.需用胰蛋白酶短时处理幼蚕组织.以便获得单个细胞．将人工丝蛋白基因导入到蚕卵体内.常用的方法是显微注射法．(2)绿色荧光蛋白基因可以作为标记基因.用于鉴别和筛选� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

11．研究人员将人工丝蛋白基因导入到蚕卵内，对蚕卵的基因改造获得成功．含有人工丝蛋白的蚕茧发出绿色荧光，比正常的蚕茧更加轻薄．请回答下列问题：
（1）进行转基因操作前，需用胰蛋白（或胶原蛋白）酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞．将人工丝蛋白基因导入到蚕卵体内，常用的方法是显微注射法．
（2）绿色荧光蛋白基因可以作为标记基因，用于鉴别和筛选蚕卵中是否含有人工丝蛋白基因．
（3）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导人家蚕细胞．PCR技术利用的原理是DNA双链复制，该PCR 反应体系的主要成分应该包含扩增缓冲液（含Mg²⁺）、水、4种脱氧核苷酸、模板DNA、Taq酶（或耐高温的DNA聚合酶）和引物．
（4）生物反应器培养家香细胞时会产生接触抑制，所以培养时通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以通过增大细胞贴壁生长的附着面积来增加培养的细胞数量，也有利于空气交换．

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、动物细胞培养过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养．

解答解：（1）动物细胞培养时，首先需要用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理幼蚕组织，以便获得单个细胞．将目的基因（人工丝蛋白基因）导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．
（2）绿色荧光蛋白基因可以作为标记基因，用于鉴别和筛选蚕卵中是否含有人工丝蛋白基因．
（3）PCR技术的原理是DNA双链复制；PCR反应体系的主要成分应该包含扩增缓冲液（含Mg²⁺）、水、4种脱氧核苷酸、模板DNA、Taq酶（或耐高温的DNA聚合酶）和一对引物．
（4）生物反应器培养家香细胞时会产生接触抑制，所以培养时通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以通过增大细胞贴壁生长的附着面积来增加培养的细胞数量，也有利于空气交换．
故答案为：
（1）胰蛋白（或胶原蛋白）显微注射法
（2）标记基因
（3）DNA双链复制 Taq酶（或耐高温的DNA聚合酶）引物
（4）增大细胞贴壁生长的附着面积

点评本题考查基因工程和细胞工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节；识记动物细胞培养的过程及条件，能结合所学的知识准确答题．

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