Question

12．我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是一种叫做乙肝表面抗原的蛋白质（S蛋白），对应的基因为s基因．请回答：
（1）在构建重组DNA分子时，要用限制性核酸内切酶处理s基因和载体DNA，并用DNA连接酶使两者结合．将重组DNA分子导入到哺乳动物细胞，经筛选得到工程细胞．
（2）在细胞培养过程中，工程细胞在生长过程中有接触抑制现象，需要定期使用胰蛋白酶处理，以便于分瓶培养．
（3）为提髙工程细胞培养的成功率，下列措施中不需采用的是A．
A．取单个细胞进行培养   B．加入胰岛素
C．二氧化碳培养箱          D．加入动物血清
（4）由于哺乳动物细胞培养较难，成本较高，近些年科学家们又发明了“乳腺生物发生器”，进而从转基因动物的乳汁中提取所需产品．在这种技术中，作为重组DNA分子受体细胞的一般是受精卵．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养．
3、动物细胞培养的条件：
（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物．
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．
（3）温度和PH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4．
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO₂（维持培养液的PH）．

解答 解：（1）在构建重组DNA分子时，要用限制性核酸内切酶处理s基因和载体DNA，并用DNA连接酶使两者结合．
（2）在动物细胞培养过程中存在接触抑制现象，需要定期使用胰蛋白酶处理，以便于分瓶培养．
（3）A、取单个细胞进行培养不会提髙工程细胞培养的成功率，A错误；
B、胰岛素能促进血糖进入组织细胞，因此提髙工程细胞培养的成功率，应该在培养基添加胰岛素，B正确；
C、动物细胞培养时需要一定的气体环境，因此需要放在二氧化碳培养箱，C正确；
D、动物细胞培养时，为了给细胞提供充足的营养，需要在培养基中加入动物血清，D正确．
故选：A．
（4）培育转基因动物时，应该以受精卵作为受体细胞，因为受精卵的全能性最高．
故答案为：
（1）s基因和载体DNA      DNA连接
（2）接触抑制      胰蛋白     
（3）A     
（4）受精卵

点评 本题考查基因工程和细胞工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、操作工具及操作步骤；识记动物细胞培养的过程及条件，能结合所学的知识准确答题．