Question

7．某化工厂的污水池中含有一种难以降解的有害有机化合物A．研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素和水配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）．实验的主要步骤如图所示，请分析回答下列问题．

（1）目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的化合物A，实验需要振荡培养，由此推测目的菌的代谢类型是异养需氧型．
（2）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量最少的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量增多．
（3）转为固体培养基时，常采用平板划线法和稀释涂布平板法进行接种．平板划线法所使用的工具称接种环（针）这种工具操作时应采用的灭菌方法是灼烧灭菌．接种时，在第二次及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线．
（4）某同学将污水样液制成了10^-1〜10^-4的四个稀释样液，分别取0.1mL接种到4组（每组4个）固体选择培养基上，若在10^-3组的4个平板上，获得的菌落数是257、39、38和37，则每升污水样液中的活菌数约为3.8×10⁸个．
（5）在上述实验操作过程中，获得纯净目的菌的关键是防止外来杂菌的污染．若要将获得的纯净目的菌种进行长期保存，常采用甘油管藏法．

Answer 1

分析 分析题干信息：该实验的目的是筛选出高效降解化合物A的细菌，在以化合物A为唯一碳源的培养基中只有能降解化合物A的微生物才能以化合物A为碳源和氮源生长繁殖，不能利用化合物A的微生物因缺乏碳源和氮源，无法生长繁殖；分解化合物A的微生物是需氧微生物，因此在培养过程中应该振荡培养，增加培养液中的溶氧量满足微生物对氧气的需求；对于培养基应该进行高压蒸汽灭菌，彻底杀灭包括芽孢在内的一切微生物，检验培养基灭菌是否彻底的方法是对不接着菌种的空白培养基进行培养，看是否会长出菌落．实验结束时应该将使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，防止污染环境．

解答 解：（1）培养基的基本成分包括碳源、氮源、水和无机盐，该培养基由化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制而成，因此化合物A为目的菌提供了碳源和氮源；在培养过程中振荡培养的目的是增加培养液中的溶氧量，以满足微生物对氧气的需求，这说明目的菌的新陈代谢类型是异养需氧型．
（2）化合物A为目的菌提供了碳源和氮源，因此培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量最少的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量增多．
（3）接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法．平板划线法所使用的工具是接种环，对其灭菌应该采用灼烧灭菌法．接种时，在第二次及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线．
（4）取0.1mL接种到4组（每组4个）固体选择培养基上，若在10^-3组的4个平板上，获得的菌落数是257、39、38和37，其中第一个平板上数据与其他相差较大，不能用于计数，则每升污水样液中的活菌数约为$\frac{39+38+37}{3}{×10}^{3}×\frac{1}{0.1}{×10}^{3}$=3.8×10⁸个．
（5）在上述实验操作过程中，获得纯净目的菌的关键是防止外来杂菌的污染．若要将获得的纯净目的菌种进行长期保存，常采用甘油管藏法．
故答案为：
（1）化合物A     异养需氧型
（2）最少
（3）稀释涂布平板法      接种环（针）      灼烧灭菌       上一次划线的末端
（4）3.8×10⁸
（5）防止外来杂菌的污染  甘油管藏

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记接种微生物常用的两种方法；识记无菌技术及菌种保藏方法，能结合所学的知识准确答题．