题目内容
【题目】下列是基因工程的有关问题，请回答：
(1)限制性核酸内切酶可以识别双链DNA分子中的特定核苷酸序列，并可以使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的________(填化学键名称)断裂，形成的末端总体可分为两种类型，分别是________。
(2)目的基因和运载体重组时需要的工具酶是________，和限制性核酸内切酶相比，它对所重组的DNA两端碱基序列________(有或无)专一性要求。
(3)图1表示构建表达载体时的某种质粒与目的基因。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是－G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC－。分析可知，最好选择限制酶________切割质粒，限制酶________切割目的基因所在的DNA，这样做的好处分别是________、________。
【答案】磷酸二酯键粘性末端和平末端DNA连接酶无酶Ⅰ酶Ⅱ酶Ⅰ切割质粒不会把两个标记基因都破坏目的基因两端均有酶Ⅱ的识别序列
【解析】
试题本题考查基因工程的原理及操作步骤，掌握基因工程的操作工具及各工具的作用，再结合所学的知识准确答题。
（1）限制性核酸内切酶（限制酶）能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式。分别为黏性末端和平末端。
（2）目的基因和运载体重组时需要DNA连接酶连接两个核苷酸之间的磷酸二酯键。多种限制酶切割，形成不同的切割位点，所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列就没有专一性要求。
（3）图1中显示，已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，酶Ⅰ切割质粒不会把两个标记基因都破坏，最好选择限制酶I切割质粒。限制酶Ⅱ的识别序列和切点是一↓GATC-，目的基因两端均有酶Ⅱ的识别序列，因此用限制酶II切割目的基因所在的DNA。
