题目内容
【题目】植物细胞壁中存在大量不能被猪消化的多聚糖类物质，如半纤维素多聚糖、果胶质（富含有半乳糖醛酸的多聚糖）等。研究人员通过基因工程、胚胎工程等技术培育出转多聚糖酶基因manA猪，主要流程如下图（neo为新霉素抗性基因）。
（1）将重组质粒成功导入受体细胞后，经培养，发现约有50%的细胞能正常表达目的基因产物，原因是_______________________。通过①过程获得的重组质粒含有4.9kb个碱基对，其中manA基因含有1.8kb个碱基对。若用BamHI和EcoRI联合酶切割其中一种重组质粒，只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段，若用上述联合酶切割同等长度的另一种重组质粒，则可获得___________kb长度两种的DNA片段.
（2）图2中，猪胎儿成纤维细胞一般选择传代培养10代以内的细胞，原因是_____________，猪的卵母细胞一般要培养到___________________期。
（3）在④过程的早期胚胎培养时，通常需要定期更换培养液，目的是______________，一般培养到______________________阶段，可向受体移植。
（4）⑤过程前，通常需对受体母猪注射孕激素，对其进行_____________处理。与普通猪相比，该转基因猪的优势是___________________________________________.
【答案】目的基因与质粒连接时，存在正向连接和反向连接两种 1.4和3.5 保持了正常的二倍体核型，遗传物质不变 MⅡ中 清除代谢废物（减少代谢废物对细胞的毒害，补充营养） 桑葚胚或囊胚 同期发情 能分泌多聚糖酶，提高饲料的利用率
【解析】
由图1可知，BamHI与BglⅡ切割产生的黏性末端相同，两种酶切割后，可以用DNA连接酶进行连接，但连接之后的产物不能被BamHI或BglⅡ识别切割。
由图2可知，①构建基因表达载体、②把目的基因导入受体细胞、③核移植、④早期胚胎培养、⑤胚胎移植。
（1）由于BamHI与BglⅡ切割产生的黏性末端相同，用这两种限制酶切割目的基因和质粒后，构建基因表达载体时，会出现正向连接和反向连接两种重组质粒，故会出现部分细胞不能正常表达目的基因产物。通过①构建基因表达载体过程获得的重组质粒含有4.9kb个碱基对，其中manA基因含有1.8kb个碱基对。重组质粒存在正向连接和反向连接两种类型，由于BamHI与BglⅡ切割产生的黏性末端经连接后，不能被BamHI或BglⅡ识别，只有BamHI切割的黏性末端经过连接后可以被BamHI识别切割。故重组质粒中只有1个BamHI识别位点和1个EcoRI识别位点。若用BamHI和EcoRI联合酶切割其中一种重组质粒，只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段，说明该重组质粒中BamHI识别位点与EcoRI识别序列的最短距离是1.7kb，则另一种连接方式的重组质粒中，BamHI识别位点和EcoRI识别位点的距离分别是1.7kb+1.8kb=3.5kb和3.2-1.8=1.4kb，故用上述联合酶切割同等长度的另一种重组质粒，则可获得3.5kb和1.4kb两种长度的DNA片段。
（2）图2中，猪胎儿成纤维细胞一般选择传代培养10代以内的细胞，因为10代以内的细胞可以保持正常的二倍体核型，遗传物质不变。猪的卵母细胞一般要培养到减数第二次分裂的中期再进行核移植。
（3）在④早期胚胎培养时，为了减少代谢废物对细胞的毒害，及时补充营养，通常需要定期更换培养液，一般培养到桑椹胚或囊胚阶段，可进行胚胎移植。
（4）⑤胚胎移植前，通常需对受体母猪注射孕激素进行同期发情处理。与普通猪相比，转多聚糖酶基因manA猪能分泌多聚糖酶，提高饲料的利用率。
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