Question

16．下面表示科学家培育耐寒生物的过程，请回答：
cDNA文库$\stackrel{获取}{→}$抗冻蛋白基因$\stackrel{①}{→}$更多抗冻蛋白基因$\stackrel{构建}{→}$②$\stackrel{导入}{→}$受体细胞→耐寒生物
（1）从cDNA文库中获取的目的基因无（有/无）启动子．实现①过程常用PCR技术扩增．该技术的原理是DNA的双链复制．在PCR反应体系中应含有扩增缓冲液、4种原料、模板DNA、引物及热稳定DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）．
（2）②表示基因表达载体，其中标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因．
（3）若要培育抗冻能力强的转基因羊，可将鱼的抗冻蛋白基因导入羊的受精卵中，该过程常用的方法是显微注射法，培育该转基因羊的最后一道“工序”是胚胎工程的胚胎移植技术．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫这种生物的cDNA文库，由于启动子不能转录，因此逆转录形成的cDNA中没有启动子；PCR的原理是DNA的双链复制；PCR是在较高温度下进行的，因此需要热稳定DNA聚合酶．
（2）②表示基因表达载体，其中标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因．
（3）培育转基因动物时，常以受精卵作为受体细胞，因为受精卵的全能性最高；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；培育该转基因动物的最后一道“工序”是胚胎移植．
故答案为：
（1）无       DNA的双链复制    热稳定DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）
（2）基因表达载体    鉴别受体细胞中是否含有目的基因
（3）受精卵   显微注射法    胚胎移植

点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．