Question

19．利用转基因山羊乳腺生物反应器可生产人促红细胞生成素（EPO），获得转基因山羊的过程如下图．请据图回答下列问题：

（1）在已知EPO基因的上游和下游碱基序列的前提下，过程①获取目的基因的方法为PCR扩增．
（2）在过程②中，应用同一种限制酶切割目的基因和质粒，使其具有相同的黏性末端．EPO基因表达载体上要具备启动子和终止子等调控元件，以便完成EPO基因的转录．
（3）在过程③中，用显微注射法法将EPO表达载体移入雄原核中．在过程⑤前，需对囊胚期的细胞进行鉴定：一是用抗原-抗体杂交法鉴定EPO基因表达产物；二是用DNA分析法鉴定囊胚的性别，选用雌性胚胎．
（4）为获得更多转基因山羊，一方面可对供体母山羊注射促性腺激素促进超数排卵．
另一方面，可对早期胚胎进行分割移植，胚胎分割的关键是将内细胞团均分．

Answer 1

分析 分析题图：图示是获得转基因山羊的过程图，其中①表示获取目的基因的过程；②表示基因表达载体的构建过程；③表示将目的基因导入受体细胞的过程；④表示早期胚胎培养过程；⑤表示胚胎移植过程．

解答 解：（1）利用PCR技术获取目的基因的前提条件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列．因此，在已知EPO基因的上游和下游碱基序列的前提下，可以合成一对引物，此时宜采用PCR技术获取目的基因．
（2）②表示基因表达载体的构建过程，该过程中首先要用同一种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，以便产生相同的黏性末端，其次用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子．基因表达载体的组成包括启动子、目的基因、标记基因和终止，其中启动子是RNA聚合酶的结合位点，终止子是转录终止的部位，因此EPO基因上要具备启动子和终止子等调控元件，以便完成EPO基因的转录．
（3）③是将目的基因导入受体细胞的过程，若受体细胞是动物细胞，则采用显微注射法．基因表达产物是蛋白质，因此要鉴定EPO基因表达产物可采用抗原-抗体杂交法；鉴定囊胚的性别可取滋养层细胞进行DNA分析．
（4）为获得更多转基因山羊，一方面可对供体母山羊注射促性腺激素促进超数排卵．另一方面，可对早期胚胎进行分割移植，胚胎分割的关键是将内细胞团均分，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育．
故答案为：
（1）PCR扩增
（2）同一种限制酶    启动子和终止子
（3）显微注射法    抗原-抗体杂交     DNA分析
（4）促性腺激素   将内细胞团均分

点评 本题结合转基因山羊的培育过程图，考查基因工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节；识记胚胎分割的特点及相关应用，能结合图中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．