Question

乙醇等“绿色能源”的开发备受世界关注．利用玉米秸杆生产燃料酒精的大致流程为：

（1）玉米秸杆经预处理后，应该选用纤维素酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖．从以下哪些微生物中可以提取上述水解过程所需的酶

 

A．酿制果醋的醋酸菌 B．生长在腐木上的霉菌 C．制作酸奶的乳酸菌 D．生产味精的谷氨酸棒状杆菌
（2）在生产糖液的过程中，为了使酶能够被反复利用，可采用

 

技术．
（3）从野生酵母群中分离纯化酵母菌，最常使用的接种方法是

 

和

 

两种．
（4）对野生酵母菌进行诱变可筛选出具有耐高糖和耐酸性的高产突变菌株，利用PCR技术可大量获得突变菌所携带的特殊基因．在PCR扩增反应中加入引物的作用是

 

．
（5）研究者设计从某种真菌中获取纤维素酶基因并转入酵母菌，获得可直接利用纤维素生产酒精的酵母工程菌．在此过程中，将纤维素酶基因切割下来所用的工具是

 

，用

 

将纤维素酶基因与载体拼接成新的DNA分子，下一步将该DNA分子

 

，以完成工程菌的构建．

Answer 1

考点：制备和应用固相化酶,微生物的分离和培养,基因工程的原理及技术

专题：

分析：1、制备固定化酵母的步骤为酵母细胞的活化→配制CaCl₂溶液→配制海藻酸钠溶液→海藻酸钠溶液与酵母细胞混合→固定化酵母菌细胞，其中活化是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态；
2、常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线分离法的过程是：由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落．

解答： 解：（1）玉米秸杆经预处理后，应该选用纤维素酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖．由于纤维素分解酶存在于分解纤维素的微生物中，故应从富含纤维素的环境中去寻找纤维素分解菌，则应从生长在腐木上的霉菌中提取．
（2）固定化酶（固定化细胞）技术可使酶反复使用，故在生产糖液的过程中，为了使酶能够被反复利用，可采用固定化酶（固定化细胞）技术．
（3）从野生酵母群中分离纯化酵母菌，最常使用的接种方法是平板划线法和稀释涂布分离法．
（4）由于DNA不能从头开始合成，故在PCR扩增反应中加入引物的作用是结合在模板DNA上，提供DNA延伸起始位点（作为聚合酶作用的起点）．
（5）基因工程过程中，将纤维素酶基因切割下来所用的工具是限制性核酸内切酶，用DNA连接酶将纤维素酶基因与载体拼接成新的重组DNA分子，下一步将该DNA分子导入受体细胞（酵母菌），以完成工程菌的构建．．
故答案为：
（1）B       
（2）固定化酶（固定化细胞）
（3）划线分离法     涂布分离法（平板划线法和稀释涂布分离法）
（4）结合在模板DNA上，提供DNA延伸起始位点（作为聚合酶作用的起点）
（5）限制酶（限制性核酸内切酶）   DNA连接酶   导入受体细胞（酵母菌）

点评：本题考查了酶的固定化、微生物培养、纤维素分解菌的分离和基因工程，意在考查考生识记所列知识点的能力和分析应用能力，试题难度一般．