Question

6．下表为几种限制性核酸内切酶识别的序列和切割的位点．如图，已知某DNA在目的基因的两端1、2、3、4四处有BamH I或EcoR I或Pst I的酶切位点．现用BamH I和EcoR I两种酶同时切割该DNA片段（假设所用的酶均可将识别位点完全切开），下列各种酶切位点情况中，可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状的是（　　）

• A． 1为BamH I，2为EcoR I，3为BamH I，4为Pst I
• B． 1为EcoR I，2为EcoR I，3为BamH I，4为Pst I
• C． 1为Pst I，2为EcoR I，3为EcoR I，4为BamH I
• D． 1为BamH I，2为EcoR I，3为Pst I，4为EcoR I

Answer 1

分析 由于限制酶具有特异性，一种限制酶只能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并形成特定的黏性末端．题干中提出“为防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状”，即要求目的基因两侧的黏性末端不同，因此一般选择不同的限制酶进行切割．

解答 解：A、如果1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ，则用BamHⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段，将会在2处和3处将目的基因切割，并且形成了不同的黏性末端，可以防止目的基因的自身环化，A正确；
B、如果1为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ，则用BamHⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段，将会在2处和3处将目的基因切割，并且2处和3处形成了相同的黏性末端，不符合题意，B错误；
C、C项中2处和3处均被EcoRⅠ酶切割，因此2处和3处形成了相同的黏性末端，不符合题意，C错误；
D、如果1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为PstⅠ，4为EcoRⅠ，则用BamHⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段，将会在2处和4处将目的基因切割，并且黏性末端相同，不符合题意，D错误．
故选：A．

点评 本题具有一定的难度，属于考纲中理解层次的要求，着重考查了限制酶的特点及应用，在基因工程中，一般为防止质粒或目的基因自身环化，一般选择不同的限制酶分别切割目的基因和质粒，以形成不同的黏性末端．