Question

20．为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图1操作．用无菌吸管从三角烧瓶中吸取1mL生牛奶稀释液至盛有9mL无菌水的试管中，如此重复3次，将10mL生牛奶稀释到10^-4浓度后，取0.1mL滴在培养基上．

（1）牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物．巴氏消毒的方法是70-75℃煮30分钟（80℃煮15分钟）．
（2）将牛奶稀释液滴加在培养基上进行涂布，应选择如图2所示的涂布工具是B．
该涂布工具最合适的灭菌方法是C．
A．火焰灼烧   B．高温高压灭菌   C．酒精擦拭    D．紫外线照射
（3）消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，若用稀释培养法检测消毒后牛奶是否含有细菌，则在操作步骤上应作什么改动？稀释次数减少．
（4）从生牛奶取样培养得到的菌落中，混有各种杂菌，从中检测出大肠杆菌的方法是，在培养基中加入伊红美蓝，具有（金属光泽的紫）黑色特征可以鉴别大肠杆菌．

Answer 1

分析 图1为稀释涂布平板法，图2中A为接种环，B为涂布器，C为滴管，D为接种针．
灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子），常用的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，适用对象主要有接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等．消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子），常用的方法主要有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法，适用对象主要有操作空间、某些液体、双手等．稀释涂布平板法常用来进行微生物的计数．

解答 解：（1）常用的消毒方法主要有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法．巴氏消毒的方法是指70-75℃煮30分钟或80℃煮15分钟，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是牛奶的营养成分不被破坏．
（2）将液体菌种接种在固体培养基上常用的方法主要是稀释涂布平板法，所用的接种工具是涂布器．即图2中的B．为防止杂菌污染，该工具应浸泡于酒精中，涂布前应将涂布器引燃（灼烧）后待冷却．
（3）消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，由于细菌数目减少，故应稀释次数减少．
（4）检测大肠杆菌的方法是在培养基中加人伊红美蓝，菌落具有（金属光泽的紫）黑色特征的可以认定为大肠杆菌．
故答案为：
（1）70-75℃煮30分钟（80℃煮15分钟） 
（2）B    B
（3）稀释次数减少
（4）伊红美蓝  （金属光泽的紫）黑色

点评 本题主要考查微生物的培养的相关知识，关键是要求学生弄清灭菌与消毒的概念、方法、适用对象和微生物的接种与计数．