Question

19．组织型纤溶酶原激活剂（tPA）在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用，现欲利用基因工程技术将tPA基因导入奶牛成纤维细胞中，并通过核移植技术获得克隆转基因奶牛，最后从奶牛乳汁中获取组织型纤溶酶原激活剂．请回答：
（1）为获得大量tPA基因，可将其连接到质粒上，通过大肠杆菌培养扩增．构建重组DNA分子时，需要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶，为了便于检测目的基因是否成功导入受体成纤维细胞中，重组DNA分子上要有标记基因．
（2）核移植时，需将成纤维细胞的细胞核移人去核卵细胞中获得重组细胞，部分原因是卵细胞的细胞质具有调控细胞核发育的作用．通过早期胚胎培养技术，将重组细胞培养成早期囊胚．将早期囊胚移植到代孕受体之前需要经过同期发情处理，以便成功植人或着床．
（3）为了繁殖更多后代，可以通过胚胎分割技术，产生同卵多仔．下列关于该技术的叙述，错误的是D．
A．增加胚胎数量，快速繁殖 B．可以采用相关酶处理卵裂球
C．该技术涉及显微操作技术 D．同卵多仔的表现型一定相同．

Answer 1

分析 1、胚胎分割的主要仪器设备：实体显微镜和显微操作仪；胚胎分割的特点：来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质．
2、胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体．用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查．
3、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）为获得大量tPA基因，可将其连接到质粒上，通过大肠杆菌培养扩增．构建基因表达载体时，首先需要限制酶切割运载体和含有目的基因的外源DNA分子，其次要求DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA；为了便于检测目的基因是否成功导入受体成纤维细胞中，重组DNA分子上要有标记基因．
（2）核移植时，需将成纤维细胞的细胞核移人去核卵细胞中获得重组细胞，部分原因是卵细胞的细胞质具有调控细胞核发育的作用．通过早期胚胎培养技术，将重组细胞培养成早期囊胚．胚胎移植前，需要经过同期发情处理，使供受体的生理状态相同，以便成功植人或着床．
（3）A．胚胎分割技术能增加胚胎数量，快速繁殖，A正确；
B．不同阶段的胚胎进行胚胎分割时，可采用的方法有一定的差别，若胚胎处于卵裂期可以采用酶解法或机械法，若囊胚则只能运用机械法分割，且要求等份分割，B正确；
C、胚胎分割技术涉及显微操作技，C正确；
D．生物的性状由基因型与环境共同决定，因此同卵多仔的基因型相同，但表现型一定相同，D错误．
故选：D．
故答案为：
（1）质粒       限制酶和DNA连接酶     标记基因 
（2）细胞核      早期胚胎培养      同期发情 
（3）D

点评 本题考查基因工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理、操作工具及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节；识记胚胎移植的基本程序及胚胎分割技术的注意事项，能结合所学的知识准确判断各选项．