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【题目】生物——选修3:现代生物科技专题]
基因工程的设计和操作中，启动子是运载体的重要组成部分。下图是一种克隆启动子的办法，请据图分析回答：
（1）启动子是__________识别和结合的部位。若要获得启动子的碱基序列不能依据基因表达产物推知，原因是_________________________。
（2）过程①、③分别使用的限制酶是____________________________。
（3）过程④的原理是__________________，需要用到的工具酶是______________。
（4）过程⑤中克隆的启动子与外源基因连接时，根据_________________设计引物a。
【答案】 RNA聚合酶 基因中启动子的碱基序列不能被转录 BamHⅠ/HindⅢ DNA双链复制 Taq酶等热稳定聚合酶 外源基因的核苷酸序列
【解析】试题分析：图中外源DNA分子上含有限制酶BamHⅠ、HindⅢ、MboⅠ、HindⅢ的识别序列和切割位点，且限制酶BamHⅠ和MboⅠ的识别序列相同，用限制酶HindⅢ、MboⅠ和HindⅢ切割都会破坏目的基因．①表示获取目的基因的过程；②表示基因表达载体的构建过程；③表示将基因表达载体中的目的基因切开；④表示采用PCR技术体外扩增目的基因。
（1）启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，由于基因中启动子的碱基序列不能被转录，故启动子的碱基序列不能依据基因表达产物推知。
（2）含有目的基因的外源DNA分子上含有限制酶BamHⅠ、HindⅢ、MboⅠ、HindⅢ的识别序列和切割位点，但是用限制酶HindⅢ、MboⅠ和HindⅢ切割都会破坏目的基因，所以过程①应选择限制酶BamHⅠ，而限制酶BamHⅠ和MboⅠ的识别序列相同，所以过程③中要将基因表达载体中的目的基因切开，应选择位于目的基因上的另一个限制酶HindⅢ。
（3）过程④表示采用PCR技术体外扩增目的基因的过程，原理是DNA双链复制，该过程在高温条件下进行，因此需要使用耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）。
（5）克隆的启动子与外源基因连接时，根据外源基因的核苷酸序列设计引物a。
