Question

6．反转录病毒载体是一种表达型质粒，结构如图所示．图上的“反转录病毒序列”可以整合到动物细胞的染色体上，不断地表达其携带的目的基因．（E、F、H分别为限制酶E、F、H的酶切位点）．
（1）反转录的原料是（4种）脱氧核糖核苷酸，需要的酶是逆转录酶．
（2）在构建重组质粒时，目的基因应插入到该质粒的位置是F（或反转录病毒序列），此过程需使用的酶是限制酶和DNA连接酶．为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加含抗生素A的培养基进行培养．

Answer 1

分析 分析题图：图示为一种表达型质粒的结构示意图，该质粒含有E、F、H三种限制酶的酶切位点；含有抗生素A抗性基因，可作为标记基因；含有“逆转录病毒序列”，该序列可以整合到动物细胞的染色体上，不断地表达其携带的目的基因，获得大量重组逆转录病毒．

解答 解：（1）逆转录是以RNA为模板合成DNA的过程，因此需要以四种脱氧核苷酸为原料，该过程需要逆转录酶的催化．
（2）根据题干信息“逆转录病毒序列可以整合到动物细胞的染色体上，不断地表达其携带的目的基因”可知，在构建重组质粒时，应将目的基因插入该质粒的F逆转录病毒序列中；构建基因表达载体时，首先应选用限制酶切割质粒和含有目的基因的外源DNA分子，此外还需要DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子．标记基因是抗生素A抗性基因，因此可用含有抗生素A的培养基筛选含有重组质粒的大肠杆菌．
故答案为：
（1）（4种）脱氧核糖核苷酸  逆转录酶
（2）F（或反转录病毒序列）   限制酶和DNA连接酶   含抗生素A

点评 本题结合质粒结构示意图，考查基因工程、基因分离定律的实质及应用，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能根据题干信息和图示信息选择合适的限制酶；掌握基因分离定律的实质，明确转基因生物可被视为杂合子，再根据题干要求答题．