Question

5．回答下列有关生物技术与基因表达的问题
如图1所示为利用现代生物技术获得能表达某蛋白酶工程菌的过程及工程菌表达目的基因的模式图．
选用的质粒A上有 I、II、III、IV四种限制酶切割位点．

（1）据图推断过程①获取目的基因时，应选用的限制酶是II和 III．过程②是利用DNA连接酶酶将目的基因与运载体连接形成重组质粒．过程③为重组质粒导入受体细胞，如受体细胞为小鼠受精卵，则选用的常规方法是显微注射．
（2）如同时用酶I和酶IV切割图中质粒A，产生1.8kb和8.2kb的两种片段（1kb=1000对碱基对），如用四种酶同时切割质粒A，则产生0.6kb和8.2kb两种片段，那么用同时用酶II和酶IV切割质粒A，则产生的片段有1.2kb和8.8kb．
（3）获得此蛋白酶后，利用酶的固定化技术能回收和重复利用此蛋白酶，如图2所示属于固定化技术中的载体结合法的是B．

Answer 1

分析 分析图1：①表示获取目的基因，②表示基因表达载体的构建过程，③表示将目的基因导入受体细胞，④表示目的基因随着大肠杆菌的增殖而扩增．
分析图2：A、D是包埋法，B是吸附法，C是化学结合法．

解答 解：（1）含有目的基因的外源DNA分子中含有三种限制酶的识别序列和切割位点，若采用限制酶Ⅰ切割会破坏目的基因，因此过程①获取目的基因时，应选用的限制酶是II和 III．过程②中将目的基因与运载体连接形成重组质粒需要DNA连接酶．过程③中将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．
（2）如同时用酶I和酶IV切割图中质粒A，产生1.8kb和8.2kb的两种片段（1kb=1000对碱基对），如用四种酶同时切割质粒A，则产生0.6kb和8.2kb两种片段，则限制酶1和Ⅱ、限制酶Ⅱ和Ⅲ、限制酶Ⅲ和Ⅳ之间的长度都是0.6kb，因此同时用酶II和酶IV切割质粒A，则产生的片段有0.6+0.6=1.2kb和8.2+0.6=8.8kb．
（3）图中A、D是包埋法，B是吸附法，C是化学结合法．化学法包括结合法、交联法，吸附法和共价键法又可统称为载体结合法．因此，图2所示属于固定化技术中的载体结合法的是B．
故答案为：
（1）II和 III   DNA连接酶    显微注射   
（2）1.2kb和8.8kb
（3）B

点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合图中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．