Question

11．幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰氏阴性螺旋状杆菌，具有强的脲酶（能降解尿素）活性，其代谢类型属于异养厌氧型（氧气浓度在5%〜8%左右适合，完全无氧或空气环境中无法生存），这种细菌是慢性胃炎、甚至胃癌发生的元凶．
（1）为了对胃炎患者的胃粘膜提取物稀释样液中幽门螺杆菌进行分离，应将样品稀释液接种于以尿素为唯一氮源的固体选择培养基上，接种后的培养皿在氧气浓度在5%-8%左右条件下，倒置于37℃的恒温培养箱中培养．
（2）分离培养幽门螺杆菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，培养基常用的灭菌方法有干热灭菌、高压蒸汽灭菌．
（3）欲检测上述培养基中是否具有幽门螺杆菌这类细菌的存在，向培养基中添加酚红指示剂，培养基中菌落周围显示红色环带，即表明这类细菌的存在，这种检测过程的机理是脲酶将培养基中的尿素分解成氨，该物质的水溶液会使酚红指示剂呈现红色．
（4）采用液体培养基培养幽门螺杆歯菌，为了测定菌液中的菌体数量，一般采用稀释涂布平板法将一定量的菌液接种到固体培养基上，统计菌落的数量来代表菌体数，这种检测方法测得的结果一般偏小（填“大”或“小”），原因是有些活菌在培养过程中死亡、有些菌落是由多个活菌共同形成的．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、消毒和灭菌

	消毒	灭菌
概念	使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法	灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象	操作空间、某些液体、双手等	接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

3、培养基按功能分：

种类	制备方法	特征	用途
选择培养基	培养基中加入某种化学成分	根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率	加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基	加入某种试剂或化学药品	依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计	鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

解答 解：（1）幽门螺杆菌具有强的脲酶（能降解尿素）活性，因此分离该菌时应将样品稀释液接种于以尿素为唯一氮源的固体选择培养基上；由于幽门螺杆菌代谢类型属于异养厌氧型（氧气浓度在5%〜8%左右适合，完全无氧或空气环境中无法生存），因此接种后的培养皿在氧气浓度在5%-8%左右条件下，倒置于37℃的恒温培养箱中培养．
（2）培养基常用的灭菌方法有干热灭菌、高压蒸汽灭菌．
（3）欲检测上述培养基中是否具有幽门螺杆菌这类细菌的存在，向培养基中添加酚红指示剂，培养基中菌落周围显示红色环带，即表明这类细菌的存在，这种检测过程的机理是脲酶将培养基中的尿素分解成氨，该物质的水溶液会使酚红指示剂呈现红色．
（4）接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可用于测定菌液中的菌体数量，即采用稀释涂布平板法将一定量的菌液接种到固体培养基上，统计菌落的数量来代表菌体数；由于有些活菌在培养过程中死亡、有些菌落是由多个活菌共同形成的，因此这种检测方法测得的结果一般偏小．
故答案为：
（1）尿素       氧气浓度在5%-8%左右
（2）干热灭菌、高压蒸汽灭菌
（3）脲酶将培养基中的尿素分解成氨，该物质的水溶液会使酚红指示剂呈现红色
（4）稀释涂布平板      菌落           小      有些活菌在培养过程中死亡、有些菌落是由多个活菌共同形成的

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记接种微生物常用的两种方法；识记无菌技术；识记分离能分解尿素的微生物的原理，再结合题中信息准确答题．