Question

2．如图是口蹄疫疫苗生产过程示意图，请据图回答下列问题：

（1）首先从口蹄疫病毒中提取部分合成病毒蛋白的RNA，而不是用口蹄疫病毒的全部RNA，原因是合成病毒蛋白的RNA控制合成的病毒蛋白质，具有抗原特性，又不会使动物致病．以合成病毒蛋白的RNA产生病毒蛋白的DNA，需用到的工具酶是逆转录酶．
（2）构建基因表达载体所需要的工具酶是限制性核酸内切酶和DNA连接酶．基因表达载体除目的基因外，还应包括启动子、终止子、标记基因．
（3）导入大肠杆菌前需先将大肠杆菌处理为感受态细胞．
（4）为检测目的基因是否导入受体细胞，常常要借助载体上标记基因的表达，更准确的方法是利用放射性同位素标记的病毒蛋白基因（目的基因）作探针与基因组DNA杂交．最后还要检测目的基因是否翻译成了病毒蛋白质，利用的技术是抗原-抗体杂交技术．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）首先从口蹄疫病毒中提取部分合成病毒蛋白的RNA，而不是用口蹄疫病毒的全部RNA，原因是合成病毒蛋白的RNA控制合成的病毒蛋白质，具有抗原特性，又不会使动物致病．以RNA为模板合成DNA的过程为逆转录过程，需要逆转录酶的催化．
（2）构建基因表达载体时，首先需要用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA和运载体，其次需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA．基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子、标记基因．
（3）将目的基因导入微生物细胞常用感受态转化法，即用用Ca²⁺处理大肠杆菌细胞，使之成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞．
（4）标记基因的作用是检测目的基因是否导入受体细胞；检测目的基因是否导入受体细胞还可以采用DNA分子杂交技术，即用放射性同位素标记的病毒蛋白基因 （目的基因） 作探针与基因组DNA杂交；检测目的基因是否翻译成了病毒蛋白质需用抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）抗原　 逆转录酶
（2）限制性核酸内切酶和DNA连接酶   　启动子、终止子、标记基因
（3）感受态
（4）标记基因   　病毒蛋白基因 （目的基因）   抗原-抗体杂交技术

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合图中信息准确答题．