Question

红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带O₂或CO₂，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题：
(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：_______、_______、_______和______。
(2)实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。
①．加入柠檬酸钠的目的是_____________________。
②．在样品处理中包括红细胞的洗涤、___________________、分离血红蛋白溶液、透析。
③．洗涤红细胞的目的是____________，你如何知道红细胞已洗涤干净？___________。
④．分离红细胞时对离心速度和离心时间的要求是_________________。
⑤．若离心速度过高和时间过长结果会怎样？_____________________。
(3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析，这就是样品的粗分离。
①．透析的目的是_____________________________。
②．透析的原理是_____________________________。
(4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。
①．样品纯化的目的是__________________。
②．血红蛋白有什么特点？____________________。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？____________________。

Answer 1

(1)样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定
(2)①．防止血液凝固       ②．血红蛋白的释放      ③．去除杂蛋白      离心后的上清液没有黄色      ④低速短时间离心，如500r/min离心2min        ⑤．离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度
(3)①．去除相对分子量较小的杂质      ②．透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内
(4)①．通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂蛋白除去         ②．血红蛋白呈现红色 在凝胶色谱分离时可通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液，这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。