Question

17．表中是筛选异养型细菌的培养基配方．

KH2PO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO4•7H2O	0.2g
FeCl3	0.1g
X	1g
维生素	微量
琼脂	15g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000mL

（1）苯胺是致癌物质，土壤中有分解苯胺的异养型细菌，此培养基中的成分X除为目的菌提供能源外，还能提供碳源和氮源，该培养基从作用看属于选择培养基．制备固体培养基时调节pH在溶化步骤后．
（2）如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，则获得图B效果的接种方法是平板划线法．运用图A所示接种方法统计的菌落常常比活菌的实际数目低．在探究“酵母菌种群数量变化”实验中，已知每个计数室由25×16个小格组成，容纳液体的总体积为0.4mm³，观察到图中计数室所示a、b、c、d、e 5个中格共有酵母菌80个，则1mL样液中约有酵母菌10⁶个．
（3）在以尿素为唯一氮源的培养基中加酚红指示剂可初步鉴定该种细菌能够分解尿素，原理用方程式表示为CO（NH₂）₂+H₂O$\stackrel{酶}{→}$CO₂+2NH₃；在筛选能够分解纤维素的微生物过程中，常用到刚果红染色法．在培养基灭菌后倒平板前以1：200比例加入染液，这种鉴定方法的不足是假阳性反应的干扰．
（4）培养基通常用高压蒸汽灭菌法灭菌，若无条件，也可用间隙灭菌法．其程序是：第一天，将培养基在100℃下维持30min，然后在36～37℃下放置24h；之后重复前面的操作2-3次．请分析：
①培养基在100℃下维持30min的目的是杀死活的微生物体．
②在36～37℃下放置24h后再加热的目的是杀死24h中由微生物的芽孢或孢子萌发而生长的微生物细胞．
③怎样证明间隙灭菌法的效果？将培养基处于37℃下放置3～5d，仍无微生物生长．

Answer 1

分析 1、微生物的营养物质主要有：碳源、氮源、水和无机盐等．筛选分离微生物时常用选择培养基，培养基在灭菌之前要调整pH，对培养基要进行高压蒸汽灭菌．
2、据图1 分析，图示A为平板划线法接种，图示B为稀释涂布平板法接种．
3、分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素．

解答 解：（1）根据培养基的配方可以看出，所给的物质中不能为微生物提供碳源和氮源，因此微生物生长所需要的碳源和氮源，可以由X提供．该培养基从作用看属于选择培养基，在制备固体培养基时一般要先溶化再调节PH值．
（2）B图为平板划线法；运用A所示接种方法统计的菌落常常比活菌的实际数目低，因为一个菌落可能是由一个或多个细菌繁殖形成．5个中格共有蓝藻80个，则25个中格有400个蓝藻，25个中格的体积是0.4mm³，所以1ml样液中约有蓝藻=400÷0.4×1000=10⁶个．
（3）分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素；在筛选能够分解纤维素的微生物过程中，常用到刚果红染色法．在培养基灭菌后倒平板前以1：200比例加入染液，这种鉴定方法的不足是假阳性反应的干扰．
（4）培养基通常用高压蒸汽灭菌法灭菌．
①培养基在100℃下维持30min可以杀死活的微生物体．
②在36～37℃下放置24h后再加热的目的是杀死24h中由微生物的芽孢或孢子萌发而生长的微生物细胞．
③将培养基处于37℃下放置3～5d，仍无微生物生长，说明间隙灭菌法效果良好．
故答案为：
（1）碳源和氮源　选择　溶化　
（2）平板划线法　低　10⁶
（3）酚红指示剂　CO（NH₂）₂+H₂O$\stackrel{酶}{→}$CO₂+2NH₃    刚果红  1：200  假阳性反应的干扰
（4）高压蒸汽灭菌    ①杀死活的微生物体　②杀死24 h中由微生物的芽孢或孢子萌发而生长的微生物细胞　③将培养基处于37℃下放置3～5 d，仍无微生物生长

点评 本题主要考查微生物的营养物质、平板计数法和尿素分解菌的筛选鉴定等内容，意在加强学生对相关知识点的识记与理解．