题目内容

17．啤酒酵母是啤酒工业发酵菌种，对啤酒的品质、风味有很大影响．请回答：
（1）若实验室中啤酒酵母菌种被杂菌污染，可采用划线分离法进行纯化培养：接种时，先将接种环在酒精灯火焰上灼烧，待其冷却 后，蘸取带菌培养物放到新的培养基中．倒置培养皿恒温培养直到出现单菌落，再进行菌种鉴定．
（2）为实现啤酒发酵连续生产，酵母细胞固定化技术已在啤酒工业中广泛应用．例如，将啤酒酵母和海藻酸钠混合均匀，经CaCl2处理形成凝胶颗粒，而酵母细胞则被固定在其内部．这种固定化方法称为B（A．吸附法   B．包埋法   C．交联法   D．共价偶联法）．
（3）科研人员将表达乙肝病毒表面抗原的基因构建在重组质粒中，进而转入啤酒酵母/受体细胞/宿主细胞，发酵生产转基因酵母乙肝疫苗．在构建重组质粒过程中，通过同种限制性核酸内切酶（-G↓AATTC-）切割得到的一个目的基因和一个开环质粒，共有D（A．1 个    B．2 个    C．3个D．4 个）粘性末端．将重组质粒导入受体细胞的操作步骤完成以后，需要对所有受体细胞进行筛选，这是因为不是所有受体细胞都接纳了重组质粒．该转基因技术实践应用的成功标志是成功表达乙肝病毒表面抗原．
（4）转基因技术结合胚胎工程在高等动物育种中也有成熟应用．人们将经过基因改造的胚胎干细胞与去核卵细胞融合，得到重组（卵）细胞/重建“合子”，并促使其在体外分裂发育成早期囊胚/早期胚胎，再通过胚胎移植获得后代．目前胚胎移植是胚胎工程中获得后代的唯一方法，其原因是胚胎发育不同时期需要不同培养条件；目前尚无全体外胚胎培养技术．
（5）胚胎干细胞具有重要的生产和临床医学价值．在培养胚胎干细胞时，首先要在培养皿底部制备一层细胞，称为饲养层，其作用是促进干细胞生长、抑制干细胞分化．

分析 1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、固定化细胞：一般采用物理吸附法、化学结合法固定化酶，采用包埋法固定化细胞．
3、基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达．从分子水平上检测目的基因的方法：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．

解答 解：（1）根据实验操作可知，该微生物分离与纯化利用平板划线法，接种时，先将接种环在酒精灯火焰上灼烧，待其冷却 后，蘸取带菌培养物放到新的培养基中．倒置培养皿恒温培养直到出现单菌落，再进行菌种鉴定．
（2）由于酵母菌细胞大，不易被吸附或化学结合，因此一般用包埋法固定酵母细胞．即将啤酒酵母和海藻酸钠混合均匀，经CaCl2处理形成凝胶颗粒，而酵母细胞则被固定在其内部．
（3）科研人员将表达乙肝病毒表面抗原的基因构建在重组质粒中，进而转入受体细胞（啤酒酵母细胞），发酵生产转基因酵母乙肝疫苗．在构建重组质粒过程中，通过同种限制性核酸内切酶（-G↓AATTC-）切割得到的一个目的基因和一个开环质粒，目的基因和开环质粒上分别具有两个黏性末端，即共有4 个粘性末端．由于不是所有受体细胞都接纳了重组质粒，需要将重组质粒导入受体细胞的操作步骤完成以后，需要对所有受体细胞进行筛选．该转基因技术实践应用的成功标志是成功表达乙肝病毒表面抗原．
（4）转基因技术结合胚胎工程在高等动物育种中也有成熟应用．人们将经过基因改造的胚胎干细胞与去核卵细胞融合，得到重组（卵）细胞/重建“合子”，并促使其在体外分裂发育成早期囊胚/早期胚胎，再通过胚胎移植获得后代．由于胚胎发育不同时期需要不同培养条件，并且目前尚无全体外胚胎培养技术，因此目前胚胎移植是胚胎工程中获得后代的唯一方法．
（5）在培养胚胎干细胞时，首先要在培养皿底部制备一层细胞，称为饲养层，其作用是促进干细胞生长、抑制干细胞分化．
故答案为：
（1）划线分离法    冷却     单菌落
（2）B
（3）啤酒酵母/受体细胞/宿主细胞     D    不是所有受体细胞都接纳了重组质粒    成功表达乙肝病毒表面抗原
（4）去核卵细胞    重组（卵）细胞/重建“合子”早期囊胚/早期胚胎    胚胎发育不同时期需要不同培养条件；目前尚无全体外胚胎培养技术
（5）饲养层    促进干细胞生长、抑制干细胞分化

点评 本题考查了微生物的分离与培养、基因工程以及胚胎工程的有关知识，要求掌握微生物分离与纯化的方法，识记基因工程的操作步骤，识记细胞核移植技术的相关操作步骤，再结合所学知识准确答题．

练习册系列答案
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