Question

7．基因治疗是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的．干扰素基因缺陷的小鼠不能产生成熟的淋巴细胞，科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失的小鼠进行了基因治疗．请回答相关问题：
（1）为使干扰素基因在小鼠细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的启动子和终止子之间，这个过程需要：限制酶和DNA连接酶 酶．构建的表达载体，应该要有标记基因，它的作用是：鉴别和筛选出含有目的基因的受体细胞
（2）在构建含干扰素基因的表达载体前，可利用PCR技术对目的基因进行扩增，该技术需在Taq酶（热稳定性DNA聚合酶）酶的作用下延伸脱氧核苷酸链．将干扰素基因导入ES细胞常用的方法是显微注射法．
（3）为检测干扰素基因的表达情况，可采用抗原-抗体杂交方法，若有杂交的，表明已成功合成了干扰素．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）基因表达载体的组成包括：目的基因、标记基因、启动子、终止子．来自cDNA文库的基因是通过逆转录得到的，无启动子和终止子等，将其插入在表达载体的启动子和终止子之间才能构成完整的基因并在受体细胞内表达．构建基因表达载体时，首先要用限制酶切割外源DNA分子和运载体，其次要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子；标记基因的作用是鉴别和筛选出含有目的基因的受体细胞．
（2）PCR技术可在体外大量扩增目的基因；该技术需在Taq酶（热稳定性DNA聚合酶） 的作用下延伸脱氧核苷酸链．将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．
（3）为检测目的基因是否表达，可采用抗原-抗体杂交法．
故答案为：
（1）启动子  终止子  限制酶和DNA连接酶    鉴别和筛选出含有目的基因的受体细胞
（2）PCR   Taq酶（热稳定性DNA聚合酶）   显微注射法    
（3）抗原-抗体杂交

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．