回答有关基因工程问题．图1显示了某DNA片段的部分碱基序列和长度以及其中含有的目的基因D．图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ.BamHⅠ.MboⅠ.SmaⅠ共4种限制性核酸内切酶.它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG.G↓GATCC.↓GATC.CCC↓GGG．(1)图1的一条多核苷酸链中.位于相邻两个碱基之间的是D．A．氢键 B．磷酸.脱� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

5．回答有关基因工程问题．
图1显示了某DNA片段的部分碱基序列和长度（bp表示碱基对）以及其中含有的目的基因D．图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ共4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．

（1）图1的一条多核苷酸链中，位于相邻两个碱基之间的是D．
A．氢键 B．磷酸、脱氧核糖
C．脱氧核糖 D．脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖
（2）若用限制酶SmaI完全切割图1的DNA片段，产生的末端是平末端，其产物长度为537bp、790bp、661bp．
（3）若图2中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有4种不同长度的DNA片段．
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后，再用DNA连接酶进行处理，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是BamHI．将重组质粒导入大肠杆菌，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加抗生素B的培养基培养大肠杆菌．经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向链接．

分析分析图1：图中DNA片段含有2个限制酶MspⅠ和SmaⅠ切割位点，也含有两个限制酶BamHⅠ和MboⅠ切割位点．基因D两侧序列为GGATCC，可被限制酶BamHⅠ切割．
分析图2：质粒含有CCGG序列、GGATCC序列和GATC序列，其中CCGG序列可被限制酶MspⅠ切割，GGATCC序列和GATC序列可被限制酶MboⅠ切割．用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因，因此含有重组质粒的大肠杆菌能抗抗生素B，但不能抗抗生素A．

解答解：（1）一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接．
（2）限制酶SmaⅠ的酶切位点是CCC↓GGG，其切割产生的是平末端．图1中DNA片段含有两个SmaⅠ酶切位点，被SmaⅠ酶完全切割后出现三个长度的片段，分别是537bp、790bp、661bp．
（3）杂合子的基因型为Dd，其中D基因片段有两个SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现三个片段长度分别是537bp、790bp、661bp，发生基因突变后的d基因片段只有一个SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现两个片段长度分别是1327bp、661bp，所以从杂合子中分离的DNA片段被限制酶SmaⅠ完全切割后形成会四种不同的DNA片段．
（4）基因表达载体构建的过程中需要利用限制酶和DNA连接酶．限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点位于目的基因D上，若用这两种酶切割会被破坏目的基因D；运载体的两个标记基因上都有限制酶MboⅠ的切割位点，用该酶切割会破坏这两个标记基因，因此只能选用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和运载体．用限制酶BamHⅠ切割质粒会破坏抗生素A抗性基因，但不会破坏抗生素B抗性基因，所以导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存，因此为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加抗生素B的培养基培养．由于同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接，这样会导致部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达．
故答案为：
（1）D
（2）平 537bp、790bp、661bp
（3）4
（4）DNA连接酶?BamH I 抗生素B 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向链接

点评本题结合基因结构图和运载体结构图，考查基因工程的技术和原理，要求考生认真分析图1和图2，根据图1中信息计算限制酶SmaⅠ切割产生的片段的种类及长度；根据图1和图2中限制酶的给切割位点，明确构建基因表达载体只能用限制酶BamHⅠ，再运用所学的知识答题即可．