Question

3．牛奶是微生物生长的良好培养基．生鲜牛奶中的微生物情况反映了奶牛的健康状况，也影响奶制品的运输和贮藏．牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物．为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图1所示操作．用无菌吸管从锥形瓶中吸取1mL生牛奶稀释液至盛有9mL无菌水的试管中，混合均匀，如：此再重复2次．请回答下列有关问题：

（1）巴氏消毒的方法是70-75℃煮30分钟（80℃煮15分钟），使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是牛奶的营养成分不被破坏
（2）取最终的牛奶稀释液0.1mL滴在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是图2中的B
（3）图中所示方法为稀释培养法，理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落．若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为35个、33个、34个，则可以推测生牛奶中每毫升含细菌数为3.4×10⁶个．运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小（填“偏大”或“偏小”），原因是个别菌落可能是由2个或多个细菌形成．
（4）消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤上应做什么改动？稀释次数减少．
（5）从生牛奶取样培养得到的菌落中，混有各种杂菌，从中检测出大肠杆菌的方法是在培养基中加人伊红美蓝（金属光泽的紫），菌落具有黑色特征的可以认定为大肠杆菌．

Answer 1

分析 图1为稀释涂布平板法，图2中A为接种环，B为涂布器，C为滴管，D为接种针．
灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子），常用的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，适用对象主要有接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等．消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子），常用的方法主要有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法，适用对象主要有操作空间、某些液体、双手等．稀释涂布平板法常用来进行微生物的计数．

解答 解：（1）常用的消毒方法主要有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法．巴氏消毒的方法是指70-75℃煮30分钟或80℃煮15分钟，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是牛奶的营养成分不被破坏．
（2）将液体菌种接种在固体培养基上常用的方法主要是稀释涂布平板法，所用的接种工具是涂布器．即图2中的B．
（3）由于图中稀释了10⁴倍，牛奶中每毫升含细菌数为（35+33+34）÷3÷0.1×10⁴=3.4×10⁶个．由于经此方法接种培养时当两个或多个菌落重叠在一起时按一个菌落计算，所以运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小．
原因是 个别菌落可能是由2个或多个细菌形成．
（4）消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，由于细菌数目减少，故应稀释次数减少．
（5）检测大肠杆菌的方法是在培养基中加人伊红美蓝，菌落具有（金属光泽的紫）黑色特征的可以认定为大肠杆菌．
故答案为：
（1）70-75℃煮30分钟（80℃煮15分钟）   牛奶的营养成分不被破坏
（2）B
（3）3.4×10⁶ 偏小    个别菌落可能是由2个或多个细菌形成
（4）稀释次数减少 
（5）伊红美蓝     （金属光泽的紫）黑色

点评 本题主要考查微生物的培养的相关知识，关键是要求学生弄清灭菌与消毒的概念、方法、适用对象和微生物的接种与计数．