题目内容
【题目】PCR技术现在已经应用到临床诊断、法医鉴定、分子生物学、农牧业等领域。下图为某同学实验中，所用引物与模板配对情况（DNA聚合酶能够从引物的3ˊ端开始连接脱氧核苷酸）。下列说法正确的是（ ）
A.若用引物Ⅱ和Ⅲ进行该DNA分子扩增可获得5种序列不同的产物
B.复性温度过高导致引物不能与模板牢固结合，PCR扩增效率下降
C.设计以上引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对造成引物自连
D.为方便构建基因表达载体，可在引物中增加限制性核酸内切酶位点
【答案】ABCD
【解析】
PCR技术：
（1）概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。
（2）原理：DNA复制。
（3）前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。
（4）条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）
（5）过程：高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；中温延伸：合成子链。
A、若用引物Ⅱ和Ⅲ进行扩增，因新形成的DNA子链中，有的含有与引物Ⅱ互补配对的碱基序列，有的含有与引物Ⅲ互补配对的碱基序列，则至少在连续扩增3次后可以获得5种序列不同的产物，A正确；
B、PCR技术中，复性是指引物结合到互补DNA链。复性温度过高会引起碱基之间的氢键断裂，导致引物不能与互补DNA链（模板）牢固结合，DNA扩增效率下降，B正确；
C、设计以上引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对造成引物自连，C正确；
D、构建基因表达载体时可在引物中增加限制性核酸内切酶位点，D正确。
故选ABCD。
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