Question

测定蛋白质的相对分子质量常用的测定方法是凝胶色谱法。请回答下列问题：

（1）凝胶色谱法的原理是                                                        。

（2）在装填凝胶柱时不得有气泡的原因是                                         。

（3）某人欲使用凝胶色谱法比较A、B两种蛋白质的分子质量大小，请你选择需要的材料，帮助其设计实验步骤，并预测实验结果，得出相关结论。

实验步骤：                                                                     

实验结果及结论：                                                              

                                                                               

 （4）若由凝胶过滤法测得某一由2条肽链构成的蛋白质的相对分子质量为m，且已知氨基酸的平均相对分子质量为n。则该蛋白质是由        个氨基酸经脱水缩合而成的。

Answer 1

(1）根据相对分子质量的大小分离蛋白质

（2）气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果

（3）实验步骤：将含有A、B两种蛋白质的混合液加入装满凝胶的玻璃管上端，用缓冲液进行洗脱，检测它们洗脱的先后顺序

实验结果及结论：若A先于B洗脱出来，则A的相对分子质量大于B；若B先于A洗脱出来，则B的相对分子质量大于A

(4)   (m-36)/(n-18)

解析:

（1）利用凝胶色谱法，其中的蛋白质分子在凝胶的孔径中经过，经历的路径长花费时间长，故最后从凝胶中洗脱出来；（2）气泡使液相中存在气相，会干扰蛋白质的洗脱 （4）可设a个氨基酸，列na-(a-2)18=m方程式求得。