Question

8．某科研小组自制两种大蒜捣取液，探究它对餐具上细菌的杀灭效果，具体过程如下，请完善相关步骤：
（1）制作提取液：做法见表

编号	A组	B组
经消毒的大蒜（g）	350	350
无菌水（mL）	900	880
无菌食醋（mL）	/	20

表中A组无菌水需加入900ml
（2）取样：
①取污染程度一致的餐具若干，随机等分为甲、乙、丙三组．
②将经过灭菌处理的滤纸，贴在甲组餐具表面1min，再将该滤纸放入50ml无菌水中，充分振荡后制成细菌原液1；
③将乙、丙两组的餐具分别浸泡在等量的A组和B组提取液中后取出用无菌水的缓水流冲洗10s；
④将经过灭菌处理的滤纸，分别贴在浸泡后的乙、丙两组餐具表面各lmin，再将滤纸分别放入两瓶50ml无菌水中，充分振荡后制成细菌原液2、细菌原液3．
（3）培养和计数：采用稀释涂布平板法法分离三种原液中的细菌，且每个浓度至少涂布3个平板．制成的平板放在37℃培养48h，取出计数．
（4）本实验需另设一组，用等量无菌水涂布在未接种细菌的空白平板上，目的是检测平板灭菌是否彻底．
（5）现察记录：在下面空白处，设计A组大蒜提取液处理前后，细菌原液经适当稀释后的菌落数观察记录表．

原液 菌落数 组别	1号	2号	3号	平均值
细菌原液1
细菌原液2

．

Answer 1

分析 两种纯化细菌的方法的比较

	优点	缺点	适用范围
平板划 线分离法	可以观察菌落特征，对混合菌进行分离	不能计数	适用于好氧菌
稀释涂布 平板法	可以计数，可以观察菌落特征	吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延	适用于厌氧，兼性厌氧

检测细菌总数，可以看出采用的计数方法是稀释涂布平板法进行计数．用稀释涂布平板法测定同一样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出细菌总数．

解答 解：（1）由制备大蒜提取液的表格可知，B组加了880ml的无菌水和20ml的无菌食醋，A组不加食醋只加无菌水，为了保证无关变量相同且适宜，加无菌水的量应是880+20=900ml．
（2）取样：
①取污染程度一致的餐具若干，随机等分为甲、乙、丙三组．
②将经过灭菌处理的滤纸，贴在甲组餐具表面1min，再将该滤纸放入50ml无菌水中，充分振荡后制成细菌原液1；
③将乙、丙两组的餐具分别浸泡在等量的A组和B组提取液中后取出用无菌水的缓水流冲洗10s；
④将经过灭菌处理的滤纸，分别贴在浸泡后的乙、丙两组餐具表面各lmin，再将滤纸分别放入两瓶50ml无菌水中，充分振荡后制成细菌原液2、细菌原液3．
（3）对微生物进行培养并进行计数应采用稀释涂布平板法，且每个浓度至少涂布3个平板．制成的平板放在37℃培养48h，取出计数．
（4）本实验需另设一组，用等量无菌水涂布在未接种细菌的空白平板上，目的是检测平板灭菌是否彻底．
（5）现察记录：

原液 菌落数 组别	1号	2号	3号	平均值
细菌原液1
细菌原液2

．
故答案为：
（1）900
（3）稀释涂布平板法    3
（4）未接种细菌的空白检测平板灭菌是否彻底
（5）

原液 菌落数 组别	1号	2号	3号	平均值
细菌原液1
细菌原液2

点评 本题考查了微生物的分离与培养的有关知识，要求考生能够掌握分离微生物和统计活菌数常用的接种方法和接种工具，实验设置的单因子变量原则、对照原则、重复实验的原则，主要考查学生设计和完善实验步骤，分析实验结果获取结论的能力．