Question

【题目】土壤是“微生物的天然培养基”，下面是有关土壤中分解尿素的细菌的分离和计数的实验过程，请根据下图回答相关问题：

（1）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用_______的选择培养基进行分离，并加入____________指示剂进行鉴别。

（2）若取土样5g，应加入______配制成稀释10倍的土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如上图所示的不同浓度的土壤溶液，取样稀释前，一定要____________以减少误差。将103～107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用____________将菌液分散，每个浓度稀释液至少接种_________个平板，以减少实验误差。

（3）将接种的培养皿_________在37℃的_________箱中培养24～48h，观察并统计________，结果如下表所示。找出合适浓度，推测出每克土样中细菌数为_________________。

稀释倍数	103	104	105	106	107
菌落数（个）	>500	367	248	26	18

Answer 1

【答案】以尿素为唯一氮源 酚红 45mL无菌水 摇匀（振荡、混匀） 涂布器 3 倒置 恒温培养 菌落数 2.48×108

【解析】

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：
1．分离菌株的思路
（1）自然界中目的菌株的筛选：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
（2）实验室中目的菌株的筛选：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度。pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物
2．统计菌落数目的方法
（1）稀释涂布平板法（间接）
①当样品的稀释庋足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。
（2）利用显微镜直接计数
3．分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
4．实验流程
土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定。

（1）尿素分解菌能分解尿素作为氮源，而其他微生物在只有尿素作为唯一氮源的培养基上会因为缺少氮源而不能生长，所以为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行分离，并加入酚红指示剂进行鉴别，当尿素被分解形成氨后，会使培养基的PH升高指示剂将变红。

（2）若取土样5g，应加入45mL无菌水配制成稀释10倍的土壤溶液。取样稀释前，一定要震荡使菌体分布均匀，以减少误差。将103～107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用涂布器将菌液分散，每个浓度稀释液至少接种3个平板，以减少实验误差。

（3）将接种的培养皿倒置在37℃的恒温培养箱中培养24～48h，观察并统计菌落数。由于计数时合适的稀释倍数应以平板上出现30-300个菌落的为宜，所以稀释倍数应为105，所以根据表格数据可推测出每克土样中细菌数为248÷0.1×105=2.48×108个。