Question

15．回答下列有关的实验问题：
（1）屠呦呦在青蒿素的研发上做出了重大贡献．如要在短期内获得大量青蒿植株幼苗，可以采用植物组织培养技术技术．实验室中青蒿素与胡萝卜素的提取方法相同，决定萃取效率的主要因素是萃取剂的性质和使用量．
（2）在生活中制作酸奶就要获得优良乳酸菌菌种，应选用培养基培养．培养基中应含有碳源、氮源、水和无机盐，同时需要在培养基中添加维生素，培养时还需提供无氧条件．
（3）为了分离果胶酶产生菌，科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，震荡混匀，制成悬液．
①为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行梯度稀释，用稀释涂布平板法接种于固体培养基上．接种后的培养基倒置状态放入培养箱．
②选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落和透明圈直径的比值，筛选果胶酶高产菌株．
③将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的上清液（填“上清液”或“沉淀物”）获得粗提的果胶酶．将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性．进行吸光值测定时，需将等量失活的粗提果胶酶与等量果胶溶液混合，作为实验的对照．

Answer 1

分析 酸奶制作的原理是乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸，为了防止微生物污染，制作酸奶过程中应进行无菌操作，微生物培养所用的培养基至少包括碳源、氮源、水、无机盐等．
微生物的分离是研究和利用微生物的第一步，也是微生物工作的基本方法和重要环节．
土壤中的微生物很多，本题中要从土壤中获得果胶酶高产菌株．
接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法

解答 解：（1）可以采用植物组织培养技术，在短期内获得大量青蒿植株幼苗．萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和用量，同时还受原料颗粒的大小、含水量等条件的影响．
（2）维生素是乳酸菌生长繁殖所必须的，在体内又不能合成，因此要在培养乳酸菌的培养基中添加维生素．乳酸菌属于厌氧微生物，在有氧时无氧呼吸受抑制，因此培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件．
（3）①为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行梯度稀释，并用稀释涂布法接种于固体培养基上．接种后的培养基倒置状态放入培养箱，防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染．
②选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落和水解（透明圈）直径的比值，筛选果胶酶高产菌株．
③将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的上清液获得粗提的果胶酶．将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性．进行吸光值测定时，需将等量失活的粗提果胶酶与等量果胶溶液混合，作为实验的对照．
故答案为：
（1）植物组织培养技术    使用量
（2）维生素    无氧
（3）①梯度稀释     稀释涂布平板    倒置    ②菌落     ③上清液    等量失活的粗提果胶酶

点评 本题考查分离和培养果胶酶高产菌株的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力．