Question

（10分）长期以来 ,香蕉生产遭受病害的严重威胁 ,制约了其发展。目前 ,随着转基因抗病香蕉基因工程技术的日趋成熟 ,为培育抗病香蕉品种开辟了新途径。转基因抗病香蕉的培育过程如图所示，质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。请回答：

(1)构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶             ，对          进行切割。
(2)培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有               ，作为标记基因。
（3）能使抗病基因在香蕉细胞中特异性表达的调控序列是：        (填字母序号)。
A启动子   B终止子  C 复制原点   D标记基因
（4）将目的基因导入植物细胞常用方法有多种，图中所示方法为              。
（5）欲检测目的基因是否表达成功，可采用的技术             (填字母序号)。

A．核酸分子杂交

B．基因序列分析

C．抗原-抗体杂交

D．PCR

(6)利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成转基因植株。香蕉组织培养的培养基中除了含有一定的营养物质外还必须含有                   等植物激素，它们会在          （填图中标号）阶段发挥作用，同时     （填图中标号）阶段还需要给予一定光照。
（7）从香蕉组织块到获得转基因抗病香蕉试管苗的过程中，需经过        。(填数字)
①无丝分裂   ②有丝分裂  ③减数分裂  ④ 原代培养  ⑤ 传代培养
⑥ 植物体细胞杂交  ⑦ 细胞融合    ⑧ 脱分化     ⑨ 再分化

Answer 1

（1）PstⅠ、EcoRⅠ（答全给分）含抗病基因的DNA、质粒（答全给分）（2）抗卡那霉素基因   （3）AB  （4）农杆菌转化法   (5) C  (6) 生长素和细胞分裂素   ①和②   ②   （7）②⑧⑨

解析试题分析：根据图示，选用限制酶切割时不能破坏抗病基因，所以应选用PstⅠ和EcoRⅠ对含有抗病基因的DNA和质粒进行切割。因为培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，所以如果想利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有抗卡那霉素基因，以便作为标记基因，进行筛选。抗病基因必需具有调控序列：启动子和终止子，才能在香蕉细胞中特异性表达。将目的基因导入植物细胞的方法有：农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。图中采用的是最常用的农杆菌转化法。检测目的基因是否成功表达，可采用的方法有DNA分子杂交技术、分子杂交技术、抗原-抗体杂交技术。植物组织培养的培养基中需要的植物激素是：生长素和细胞分裂素，在①脱分化和②再分化中发挥重要作用，在②再分化过程中需要给予一定的光照，利用芽的分化。从香蕉组织块到获得转基因抗病香蕉试管苗的过程中，需经过②有丝分裂、⑧脱分化、⑨再分化。
考点：本题考查基因工程、植物组织培养技术的应用，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。