11.大肠杆菌菌群数量是衡量食品安全的一项重要指标.下面是检测食品中大肠菌群的常用方法:稀释培养测数法(MPN).
(一)实验原理
(1)大肠杆菌菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气的无芽孢杆菌.
(2)乳糖胆盐发酵管中溴甲酚紫的作用:用溴甲酚紫作指示剂,该指示剂中性时呈蓝紫色,酸性时呈黄色.胆盐的作用:胆盐对很多杂菌有抑制作用,但是对大肠杆菌不造成影响.
(3)伊红美蓝能使大肠杆菌菌落呈深紫色.
(二)实验试剂及器材(略)
(三)实验过程
(1)检样稀释
①将检样25mL放于有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液.
②用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液.按上述操作依次做10倍梯度稀释液,每稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管.
(2)乳糖发酵试验
根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管乳糖胆盐发酵管.置于36℃温箱内,培养24h,若①,则可报告为大肠菌群阴性;若②,则可报告为大肠菌群阳性.
(3)分离培养
将大肠菌群阳性的发酵管分别转种在③琼脂平板上,置36℃温箱内,培养24h,然后取出,观察④.
(4)报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值.
请回答下列问题:
①请把上述空缺步骤补充完整:
①所有发酵管中溶液呈蓝紫色(或都不产气)②所有发酵管中溶液呈黄色(或有产气者)③伊红美蓝④菌落颜色
②培养基中必须含有的基本成分是水、无机盐、碳源、氮源.
③在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先行培养24h,这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格.
④若步骤三采用平板划线法分离培养大肠杆菌,操作时,接种环应通过灼烧灭菌,在第二次及以后划线时,总是从上一次的末端开始划线.这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落.

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