Question

12．我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是一种叫做乙肝表面抗原的蛋白质（S蛋白，对应的基因为S基因），请回答下列问题．
（1）在这项技术中，S基因属于目的基因．为在短时间内大量获得S基因，可用的技术是PCR技术，其原理是DNA双链复制．
（2）用同种限制酶处理S基因和载体，并用DNA连接酶使之结合，这里的DNA片段两两结合的产物有3种，除了S基因，构建好的表达载体还应具有启动子、终止子、标记基因等结构．
（3）将表达载体导入哺乳动物细胞，筛选得到工程细胞．使用合成培养基培养工程细胞时，通常需要加入动物血清等天然成分．工程细胞在生长过程中有贴壁生长和接触抑制现象，需要定期使用胰蛋白酶处理，以便于分瓶继续培养，在培养过程中，定期收集培养液，分离纯化即可得到所需产品．
（4）由于哺乳动物细胞娇嫩挑剔，培养较难，成本较高，近些年科学家们又发明了“乳腺生物发生器”，从饲养的转基因动物分泌的乳汁中提取所需产品．在这种技术中，构建表达载体时需要将S基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，并将表达载体通过显微注射的方式，导入哺乳动物的受精卵（填细胞名称）．

Answer 1

分析 DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
由于基因的选择性表达，在利用转基因动物生产药物时，要将药用蛋白基因和乳腺组织特异性表达的启动子等调控组件重组在一起．
动物细胞培养的培养基营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．
动物细胞培养关键词辨析：
1、细胞贴壁：培养时，悬液中的细胞会很快贴附在瓶壁上．
2、细胞的接触抑制：细胞表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖．

解答 解：（1）在基因工程技术中，S基因属于目的基因．为在短时间内大量获得S基因，可用的技术是PCR技术，其原理是DNA双链复制．
（2）在基因表达载体构建的过程中，要用同一种限制酶处理S基因和运载体，并用DNA连接酶使之结合．由于目的基因和运载体均具有相同黏性末端，因此这里的DNA片段两两结合的产物有目的基因自身连接、运载体自身连接和重组质粒3种，除了S基因，构建好的表达载体还应具有启动子、终止子、标记基因等结构．
（3）在对工程细胞进行动物细胞过程中，培养基中通常需要加入动物血清等天然成分．细胞在生长过程中有贴壁生长和接触抑制现象，需要定期使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理使细胞分散，以便于分瓶继续培养，在培养过程中，定期收集培养液，分离纯化即可得到所需产品．
（4）由于哺乳动物细胞娇嫩挑剔，培养较难，成本较高，近些年科学家们又发明了从饲养的转基因动物分泌的乳汁中提取所需产品．在“乳腺生物发生器”的技术中，构建表达载体时需要将S基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起；一般动物细胞工程利用受精卵作为受体细胞，可以通过显微注射法将表达载体导入受精卵．
故答案为：
（1）目的基因　PCR技术　DNA双链复制
（2）同种限制酶　DNA连接酶　3　启动子、终止子、标记基因
（3）动物血清　贴壁生长和接触抑制　胰蛋白
（4）乳腺蛋白基因的启动子　显微注射　受精卵

点评 本题考查了基因工程以及细胞工程的相关知识，考生要识记基因工程的相关操作工具；识记动物细胞培养的培养基成分以及细胞培养的特点；识记动物基因工程的过程等相关知识，难度适中．