题目内容
构建重组质粒DNA分子需要使用的工具酶包括
A DNA聚合酶和DNA连接酶
B 限制性核酸内切酶和DNA连接酶
C 逆转录酶和RNA聚合酶
D DNA连接酶和DNA酶
B
42．(10分)
I．逆转录病毒载体是一种表达型质粒，结构如图15所示。图上的“逆转录病毒序列”可以整合到动物细胞的染色体上，不断地表达其携带的目的基因。(E、F、H分别为限制酶E、F、H的酶切位点)。
(1)逆转录的模板是＿＿＿＿，原料是＿＿＿＿＿。
(2)在构建重组质粒时，目的基因应插入到该质粒的位置是＿＿＿＿＿，此过程需使用的酶是＿＿＿。为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加＿＿＿＿＿的培养基进行培养。获取大量重组质粒后，将其再转入到某种哺乳动物细胞中，可获得大量重组逆转录病毒。
Ⅱ．图16为培育转基因小鼠基本过程的示意图。请回答下列问题：
(3)如A为重组质粒溶液，将其导人原核期受精卵的方法是＿＿＿＿＿；如A为重组逆转录病毒，还可采取＿＿＿＿方法。
(4)小鼠出生后可从其尾巴提取＿＿＿＿分子，通过＿＿＿＿＿方法，可检测出携带目的基因的小鼠。
(5)若目的基因进入细胞后插入在一条染色体DNA上，那么获得转基因纯合子小鼠的方法是＿＿＿＿＿。
(9分)回答下列有关生物工程的问题。下表是基因工程中几种限制酶识别序列及其切割位点；图2是转基因香蕉的培育过程，含目的基因的外源DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。1．图1是用限制酶_________________进行切割得到的目的基因，可以防止含目的基因的外源DNA片段切割后____。2．从图2中反映质粒作为运载体的特点是___________________。基因工程中还可以用___________________作为运载体。3．图2中构建重组质粒不能使用SmaI酶切割的原因是 ________________。4．图2中④表示组织培养过程中的________，它对植物激素调节的要求是______________。5．图2中的农杆菌是基因工程中的________________。判断该转基因工程是否成功的依据是_________。
（每空1分，共9分）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：（1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割后有 个游离的磷酸基团，若用EcoR I切割图2所示外源DNA，可得 个DNA片段。（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 ，原因是 。（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是 。（4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 。（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
14分）、某质粒上有SalI、HindⅢ、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如下图所示，请回答下列问题。
(1)将抗盐基因导入烟草细胞内,使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状(变异性状)的来源属于______ 。
(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞,一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能复制，也不能______ 。
(3)在构建重组质粒时,应选用______ 和_____ _两种酶对______ 和_____ _进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。
(4)基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检测基因表达载体是否导入了农杆菌。
培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有______ 、_____ _。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______ 菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______ 作探针进行分子杂交检测，又要用一定浓度的盐水浇灌烟草植株从 水平鉴定烟草植株的耐盐性。
(5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用_______ 技术，愈伤组织经______ 进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加 。
(10分）研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂一内皮抑素，它能有效地抑制血管增生。下面是获得重组内皮抑素的方法，请分析回答下列问题：
(1) 从肝细胞中分离总RNA，经_________获得cDNA，之后经过_________扩增内皮抑素基因。
(2) 扩增的目的基因与PUC18质粒（如图14所示）都用EcoR I和BamH I进行双酶切，然后用DNA连接酶进行连接，构建重组质粒。双酶切避免了目的基因与载体________连接，还减少了________的连接，提高了重组质粒的比例。
(3) 大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出β-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。
选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入_______物质。成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成______________颜色的菌落，原因是_____________________。之所以选择大肠杆菌作为基因工程的受体菌，其突出的优点是：___________________________________
(4) 从选择培养基中挑取所需的单个菌落接种于液体培养基中培养，获得粗提表达产物。将等量毛细血管内皮细胞接种于细胞培养板，370C培养。将等量不同浓度的粗提表达产物加进培养孔中，72h后在显微镜下观察细胞存活情况并，______________实验结果如下表所示。
结果说明__________________________________________
