Question

9．长期使用除草剂会污染环境，研究发现一除草剂（有机物）能被土壤中某细菌（M）降解．如图为分离能降解该除草剂的M菌种的过程．请回答下列相关问题：

（1）在液态培养基的基础上制备固体培养基时常用的凝固剂是琼脂．
（2）土壤有“微生物的天然培养基”之称．为了获取能降解该除草剂的M菌种，选择的土壤样品应来自
该除草剂严重污染的土壤．图中①过程所用的培养基中需要加入该除草剂作为唯一碳源．进行选择培养的目的是增加目的菌的浓度．
（3）图中②过程划线所用的工具为接种环，该工具在使用前后都要进行灼烧灭菌．
（4）若要检测土样中的细菌含量，应采用稀释涂布平板法进行接种．先将1mL土壤溶液稀释100倍，然后随机选取4个经灭菌处理的平板，其中3个平板上分别涂布0.1mL稀释液，1个平板未涂布稀释液，适当培养后，4个平板上的菌落数分别为39、38、37和0，则可计算得出每升土壤溶液中的活菌数为3.8×10⁷个．

Answer 1

分析 1、无菌技术的主要内容
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触．
2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）在液态培养基的基础上，制备固体培养基时需要用琼脂作为凝固剂．
（2）根据题意可知，“研究发现一除草剂（有机物）能被土壤中某细菌（M）降解”，因此为了获取能降解该除草剂的M菌种，选择的土壤样品应来自该除草剂严重污染的土壤．图中①过程为选择培养，因此所用的培养基中需要加入该除草剂作为唯一碳源．进行选择培养的目的是增加目的菌的浓度．
（3）图中②过程表示平板划线法，划线一般用接种环，该工具在使用前后都要进行灼烧灭菌．
（4）若要检测土样中的细菌含量，应采用稀释涂布平板法进行接种．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数，可计算得出每升土壤溶液中的活菌数为=（39+38+37）÷3÷0.1×100×1000=3.8×10⁷个．
故答案为：
（1）琼脂
（2）该除草剂严重污染的土壤    该除草剂   增加目的菌的浓度
（3）接种环       灼烧
（4）稀释涂布平板        3.8×10⁷

点评 本题考查了微生物的分离与培养的有关知识，要求考生掌握培养基的配制方法以及成分，识记无菌技术的主要内容，掌握平板划线法和稀释涂布平板法的操作步骤以及应用．