Question

下表为几种限制酶识别的序列及切割位点，下图所示，抗原基因用EcoRⅠ和A1uⅠ酶切，载体质粒上有EcoRⅠ、SmaⅠ、PstⅠ酶的识别位点，但只用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切。再通过DNA连接酶形成重组质粒T。若再用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重组质粒T，将可得到DNA片段的种类数是

限制酶	AluⅠ	EcoRⅠ	PstⅠ	SmaⅠ
识别序列和 切割位点	AG↓CT TC↑GA	G↓AATTC CTTAA↑G	CTGCA↓G G↑ACGTC	CCC↓GGG GGG↑CCC

       A．l       B．2       C．3       D．4

Answer 1

A

解析:

解答该题的关键点是对限制酶特性的理解，一种限制酶只能识别特异的核苷酸序列，并且只能在特定的位点切割。先看表，四种限制酶识别的序列各不相同，且切割的位点也不一样。AluI和SmaI切割的是平口，一般情况下在基因工程中是无意义的，但在该题中有用；ECORⅠ和PSTⅠ切得是回文序列。目的基因用EcoRI和AluI酶切得到XY片段，可以看出X端是回文序列，Y端平口，说明X端是用EcoRI酶切得，Y端使用AluI酶切得；载体质粒用EcoRI和SmaI酶切得到MN片段，可以看出M端是回文序列，N端是平口，说明M端是用EcoRI酶切得，N端使用SmaI酶切得，MN上还有一个PstI酶切点；在连接酶的作用下，目的基因和质粒构成了重组质粒。Y和N的结构由于是用AluI和SmaI酶切得的，它们重新组成的序列已经不能被题中四种限制酶中的任何一种识别并切割了。X和M的结构是用同一种限制酶EcoRI切得的，因此还能被EcoRI酶识别并切割。因此若用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到2种DNA片断；EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重组质粒，只能得到1种DNA片断。