Question

10．人类有许多疾病是由细菌或病毒导致的．因此水在饮用前的检验是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列有关问题：
（1）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为稀释涂布平板法，所用的培养基需要灭菌，其常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法．
（2）用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？需要，为什么？因为需要判断培养基是否被杂菌污染（培养基灭菌是否合格）．此方法统计的菌落往往比活菌的实际数目少．
（3）若分别取0.1mL已稀释10³倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为5.6×10⁸．已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，用以判断待检水样中是否含有大肠杆菌：通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37℃恒温箱培养24小时．试管内出现气泡现象说明水样中有大肠杆菌．

Answer 1

分析 1、稀释涂布平板法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同梯度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基上，进行培养，在稀释度足够高的菌液离，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而获得由单细胞繁殖而来的菌落．
2、对微生物进行分离、计数常用的接种方法是稀释涂布平板法，估算每毫升样品中的细菌数时，往往选取30～300的平板，取至少三个平板的平均值，每毫升样品中的细菌数=（平板的平均菌落数÷涂布的体积）×稀释的倍数．

解答 解：（1）根据题干信息“将水样进行一系列的梯度稀释”、“将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养”、“记录菌落数量”，该方法为稀释涂布平板法；培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌．
（2）由于需要判断培养基是否被杂菌污染（培养基灭菌是否合格），利用稀释涂布平板法统计样本菌落数时需要设置对照组，即将空白培养基放在相同条件培养．当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低．
（3）根据题干中提供数据，每升原水样中大肠杆菌数=（55+56+57）÷3÷0.1×10³×10³=5.6×10⁸．判断待检水样中是否含有大肠杆菌：通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37℃恒温箱培养24小时．由于“大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气”，因此试管内出现气泡现象说明水样中有大肠杆菌．
故答案为：
（1）稀释涂布平板法     高压蒸汽灭菌法
（2）需要     因为需要判断培养基是否被杂菌污染（培养基灭菌是否合格）     少
（3）5.6×10⁸       已灭菌的乳糖蛋白胨培养液      气泡

点评 本题考查了微生物的分离与培养的有关知识，要求考生能够掌握微生物分离与纯化的两种方法，掌握无菌技术的主要内容，再结合题干信息计算大肠杆菌数，难度适中．