题目内容
（七）回答下列有关微生物和基因工程问题．I大肠杆菌的培养基配方如下：
| 琼脂 | 蛋白胨 | 乳糖 | 蔗糖 | K2HPO4 | 伊红 | 美蓝 | 蒸馏水 | pH |
| 15g | 10g | 5g | 5g | 2g | 0.4g | 0.065g | 1000mL | 7.2 |
II．大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中．lacZ基因中如果没有插入外源基因，便可表达出β-半乳糖苷酶．当培养基中含有A物质时，A物质便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶，培养基中的A物质不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落．pUC118质粒还携带了氨苄青霉素抗性基因．如图是利用lacZ基因筛选重组质粒示意图．
（2）细菌结构中质粒被选为基因运载体的理由是
A．能复制 B．有限制酶切点 C．具有标记基因D．它是环状DNA
（3）图中获取人体基因时所用到的酶是
（4）作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，原因是
（5）图中的培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入
（6）将上述处理后的大肠杆菌置于图中培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：
①
②
考点：基因工程的应用
专题：
分析：分析题图：题图表示利用lacZ基因筛选重组质粒的过程，其中试管Ⅰ中进行的是基因表达载体的构建过程，试管Ⅱ是将目的基因导入受体细胞的过程；培养基用于用于筛选含有重组质粒的大肠杆菌；试管Ⅲ表示扩大培养重组菌．
分析表格：培养基中含有乳糖、蔗糖等有机碳源，说明大肠杆菌自身不能合成有机物，所以其营养类型是异养型；培养基中含有伊红和美蓝，说明该培养基属于选择培养基．
分析表格：培养基中含有乳糖、蔗糖等有机碳源，说明大肠杆菌自身不能合成有机物，所以其营养类型是异养型；培养基中含有伊红和美蓝，说明该培养基属于选择培养基．
解答：
解：（1）培养基中含有乳糖、蔗糖等有机碳源，说明大肠杆菌的营养类型是异养型；培养基中含有伊红和美蓝，说明该培养基属于选择培养基．
（2）作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点；②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来．故选：ABC．
（3）获取目的基因需要限制酶，限制酶能识别双链DNA分子的某种特定脱氧核苷酸序列，并能切断其中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键．试管Ⅰ中进行的是基因表达载体的构建过程，还需要DNA连接酶将目的基因和质粒连接形成重组质粒．
（4）PUC118质粒携带了氨苄青霉素抗性基因（标记基因），受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，这样才能在含有氨苄青霉素的培养基上筛选出导入重组质粒的受体大肠杆菌．
（5）由第（4）问可知，培养基中还需加入氨苄青霉素以筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌．
（6）lacZ基因中如果没有插入外源基因，便可表达出β-半乳糖苷酶．当培养基中含有A物质时，A物质便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶，培养基中的A物质不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落．如果长出蓝色菌落，说明自连的运载体PUC118质粒已转入受体菌，但目的基因没有接入运载体或说明重组质粒没导入受体大肠杆菌；如果长出白色菌落，说明重组质料已导入受体大肠杆菌．
故答案：（1）异养型 选择
（2）A、B、C （2分）
（3）限制性核酸内切酶 能识别双链DNA分子的某种特定脱氧核苷酸序列，并能切断其中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的键 DNA连接酶
（4）便于筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌
（5）氨苄青霉素
（6）①如果长出蓝色菌落，说明运载体pUC118质粒已转入受体菌，但目的基因没有接入运载体（或说明重组质粒没导入受体大肠杆菌）
②如果长出白色菌落，说明重组质粒已导入受体大肠杆菌
（2）作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点；②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来．故选：ABC．
（3）获取目的基因需要限制酶，限制酶能识别双链DNA分子的某种特定脱氧核苷酸序列，并能切断其中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键．试管Ⅰ中进行的是基因表达载体的构建过程，还需要DNA连接酶将目的基因和质粒连接形成重组质粒．
（4）PUC118质粒携带了氨苄青霉素抗性基因（标记基因），受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，这样才能在含有氨苄青霉素的培养基上筛选出导入重组质粒的受体大肠杆菌．
（5）由第（4）问可知，培养基中还需加入氨苄青霉素以筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌．
（6）lacZ基因中如果没有插入外源基因，便可表达出β-半乳糖苷酶．当培养基中含有A物质时，A物质便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶，培养基中的A物质不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落．如果长出蓝色菌落，说明自连的运载体PUC118质粒已转入受体菌，但目的基因没有接入运载体或说明重组质粒没导入受体大肠杆菌；如果长出白色菌落，说明重组质料已导入受体大肠杆菌．
故答案：（1）异养型 选择
（2）A、B、C （2分）
（3）限制性核酸内切酶 能识别双链DNA分子的某种特定脱氧核苷酸序列，并能切断其中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的键 DNA连接酶
（4）便于筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌
（5）氨苄青霉素
（6）①如果长出蓝色菌落，说明运载体pUC118质粒已转入受体菌，但目的基因没有接入运载体（或说明重组质粒没导入受体大肠杆菌）
②如果长出白色菌落，说明重组质粒已导入受体大肠杆菌
点评：本题考查微生物的实验室培养、基因工程的相关知识，意在考查考生分析图表的能力和识记能力；理解知识要点，把握知识间内在联系的能力；能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论．
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| A、温度降低时，e点不移，d点右移 |
| B、H2O2量增加时，e点不移，d点左移 |
| C、pH=c，e点为0 |
| D、pH=a，e点下移，d点左移 |
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| B、80%的野生油菜体内出现抗草甘膦基因是自然选择的结果 |
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