Question

【题目】下图1是利用两种不同生物技术将小鼠培育成大鼠的过程。图2中质粒是基因工程中常用的质粒pIJ702，其中tsr为硫链丝菌素抗性基因，mel是黑色素合成基因，其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；而限制酶ClaⅠ、BglⅡ、PstⅠ、SacⅠ、SphⅠ在pIJ702上分别只有一处识别序列。

（1）图1中应用到的生物工程技术有______________。

A.核移植技术 B.转基因技术

C.胚胎移植 D.动物细胞培养

（2）若大鼠甲和大鼠乙体内X染色体上均带有某种致病基因，则培育出的大鼠丙和大鼠丁携带致病基因的是________（不考虑基因突变）。

（3）c分子称为____________。构建c时，应选用限制酶和________，影响酶处理效果的因素可能有________

A. 反应温度　B. 缓冲液pH　C. 酶的纯度　D. 氧气浓度

（4）以SacⅠ和SphⅠ同时切割大鼠生长激素基因和质粒pIJ702，获取的目的基因去置换pIJ702上0.4 kb的片段，构成质粒pZHZ8。上述两种质粒的限制酶酶切片段长度列在表1中。由此判断目的基因的片段长度为__________kb。参照表1数据，如果用PstⅠ和ClaⅠ同时酶切质粒pZHZ8，则两种酶可将pZHZ8切成__________个片段。

（5）质粒pZHZ8上的标记基因是____________，在含硫链丝菌素固体培养基上培养后，筛选过程中要淘汰________色的菌落。

Answer 1

【答案】ABCD 大鼠丙 重组质粒 DNA连接酶 ABC 1.4 4 tsr基因（或硫链丝菌素抗性基因） 黑

【解析】

分析图1：图1是利用两种不同生物技术将小鼠培育成大鼠的过程。Ⅰ采用了核移植技术；Ⅱ采用了基因工程技术，其中①表示基因表达载体的构建过程，然后导入小鼠受精卵。

（1）图1中，技术Ⅰ采用了核移植、动物细胞培养、胚胎移植等技术，技术Ⅱ采用了基因工程、动物细胞培养和胚胎移植等技术，因此图1中应用到的生物工程技术有核移植技术、转基因技术、胚胎移植技术、动物细胞培养技术等，ABCD正确。故选ABCD。
（2）大鼠丙的细胞核遗传物质都来自大鼠甲，因此且携带致病基因；大鼠丁只导入了大鼠乙的一个基因，因此不携带致病基因。

（3）c是构建好的基因表达载体（重组DNA分子或重组质粒）；应选用限制酶和DNA连接酶，影响酶的因素都会影响限制酶的处理效果，所以影响限制酶处理效果的因素可能有温度、pH、酶纯度等，即ABC。

（4）质粒PIJ702的长度为5.7kb，而重组质粒pZHZ8的长度为6.7kb，又已知构建基因表达载体时，目的基因置换了PIJ702上0.4kb的片段，由此判断目的基因的片段长度为6.7-5.7+0.4=1.4kb．用ClaⅠ切割质粒PIJ702时只产生一种长度的DNA片段，但用该酶切割重组质粒pZHZ8时能产生两种长度的DNA片段，这说明目的基因中含有ClaⅠ的切割位点，同理目的基因中也含有PstⅠ的切割位点，即重组质粒pZHZ8中含有2个PstⅠ酶切位点，也含有2个Cla l酶切位点。因此，用这两种酶同时酶切重组质粒pZHZ8时，可将pZHZ8切成4个片段。
（5）构建基因表达载体时，破坏了mel（黑色素合成基因），但没有破坏tsr（硫链丝菌素抗性基因），因此重组质粒pZHZ8上的标记基因是tsr基因（硫链丝菌素抗性基因）；由于mel（黑色素合成基因）被破坏，含有重组质粒的受体细胞不能表达产生黑色素，因此重组质粒中的在含硫链丝菌素固体培养基上培养后，筛选过程中要淘汰黑色的菌落。