Question

14．利用生物工程技术，可从转基因奶山羊乳汁中分离获得凝血因子IV，用于血友病的治疗．请回答下列问题：
（1）根据凝血因子IV基因的碱基序列，可用PCR技术获取并扩增基因．构建该基因表达载体时，所用到的工具酶是限制性核酸内切酶和DNA连接酶，该基因表达载体中，除凝血因子IV和标记基因外，还应该包括启动子和终止子．
（2）将目的基因表达载体导入奶山羊受精卵的常用方法是显微注射法．受体细胞选用受精卵的优点是细胞大易操作、营养物质含量高和细胞全能性高．
（3）在体外胚胎培养时，应选用囊胚的滋养层细胞进行DNA分析，用于选择雌性胚胎．
（4）人凝血因子IV是一种胞外酶，该蛋白的加工是在内质网、高尔基体等细胞器上进行的．人凝血因子IV只在乳腺细胞合成的原因是基因的选择性表达．

Answer 1

分析 1、启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质．
终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端．
2、分泌蛋白的合成、加工和运输过程：最初是在内质网上的核糖体中由氨基酸形成肽链，肽链进入内质网进行加工，形成有一定空间结构的蛋白质由囊泡包裹着到达高尔基体，高尔基体对其进行进一步加工，然后形成囊泡分泌到细胞外．
3、在做胚胎性别鉴定时，需要取囊胚的滋养层细胞做DNA分析，进行性别鉴定．

解答 解：（1）可以根据基因编码序列两端的部分碱基序列设计引物，用PCR技术进行体外大量扩增获得目的基因．构建该基因表达载体时，需要限制酶内切酶切割目的基因和运载体，再用DNA连接酶链接，形成表达载体．启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质．终止子也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端．
（2）受体细胞是动物细胞，常用显微注射法将目的基因导入受体细胞中．由于受精卵细胞大易操作、营养物质含量高、细胞全能性高，因此常被作为受体细胞选用．
（3）在做胚胎性别鉴定时，需要取囊胚的滋养层细胞做DNA分析，进行性别鉴定．
（4）分泌蛋白在内质网上的核糖体上合成，进入内质网进行加工、分类、包装，形成囊泡进入高尔基体，由高尔基体进行进一步加工，形成囊泡，运向细胞膜，由细胞膜分泌到细胞外．由于基因的选择性表达，所以人凝血因子IV只在乳腺细胞合成．
故答案为：
（1）PCR   限制性核酸内切酶和DNA连接酶   启动子和终止子
（2）显微注射法   细胞全能性高
（3）滋养层细胞
（4）内质网、高尔基体      基因的选择性表达

点评 本题考查基因工程、细胞工程和胚胎工程等知识，要求考生识记基因工程的基本操作步骤；识记动物细胞培养的条件；识记胚胎工程的相关技术及操作，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记层次的考查．