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敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。运用基因重组进行基因敲除是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如图所示。

请回答下列问题：

（1）在把与靶基因序列同源的目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的运载体与之结合，形成的DNA分子称为________，在这个过程中所需的工具酶有________和________。

（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞应该是________。

（3）上述途径获得的动物，其后代是否都含目的基因。为什么？________。

（4）以质粒为运载体，用同一种限制酶切割质粒和目的基因，在切割后的运载体与目的基因连接时，连接方式有________种。

（5）上述过程实现的重组类似于减数分裂中________时期的________现象。

答案：
解析：

　　答案：（1）重组DNA分子　限制酶　DNA连接酶

　　（2）受精卵

　　（3）否，在形成生殖细胞时等位基因会发生分离

　　（4）3

　　（5）四分体　交叉互换

　　解析：（1）基因工程中常用的工具酶为限制酶和DNA连接酶，目的基因与运载体结合后形成重组DNA分子。

　　（2）由于动物体细胞的全能性较低，应用受精卵作为受体细胞。

　　（3）由于在受精卵中只存在一个目的基因，在形成配子的过程中等位基因分离，一半配子中不含目的基因。

　　（4）由于经切割后的目的基因和运载体具有相同的黏性末端，在DNA连接酶的作用下运载体和运载体、目的基因和目的基因、运载体和目的基因都有可能连接。

　　（5）由图中可知应为个别基因的替换，类似于减数第一次分裂前期的交叉互换现象。


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敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。运用基因重组进行基因敲除是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如图所示。

请回答下列问题：
（1）在把与靶基因序列同源的目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的运载体与之结合，形成的DNA分子称为______，在这个过程中所需的工具酶有______和____。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞应该是_____________。
（3）上述途径获得的动物，其后代是否都含目的基因。为什么？_______________________。
（4）以质粒为运载体，用同一种限制酶切割质粒和目的基因，在切割后的运载体与目的基因连接时，连接方式有________种。
（5）上述过程实现的重组类似于减数分裂中_________时期的______________现象。

（15分）基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。“基因敲除细胞”构建过程如下：
第一步：从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞（ES），在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”。
第二步：构建基因表达载体。取与靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂与靶基因的DNA正好配对，所以能像“准星”一样，将表达载体准确地带到靶基因的位置。
第三步：将表达载体导入胚胎干细胞，并与其内靶基因同源重组，完成胚胎干细胞的基因改造。
第四步：基因改造后的胚胎干细胞增殖、筛选。
请根据上述资料，回答下列问题：
（1）在把与靶基因序列同源的目的基因导入受体细胞前，应首先完成                。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常是            ；若用大肠杆菌储存目的基因，则需先将其处理为            细胞。
（3）上述资料中neoR基因的作用最可能是            。
（4）获得的小鼠，通过有性生殖产生的后代是否都含该目的基因            。

敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。运用基因重组进行基因敲除是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如图所示。

请回答下列问题：

（1）在把与靶基因序列同源的目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的运载体与之结合，形成的DNA分子称为______，在这个过程中所需的工具酶有______和____。

（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞应该是_____________。

（3）上述途径获得的动物，其后代是否都含目的基因。为什么？_______________________。

（4）以质粒为运载体，用同一种限制酶切割质粒和目的基因，在切割后的运载体与目的基因连接时，连接方式有________种。

（5）上述过程实现的重组类似于减数分裂中_________时期的______________现象。

 

 

（15分）基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。“基因敲除细胞”构建过程如下：

第一步：从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞（ES），在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”。

第二步：构建基因表达载体。取与靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂与靶基因的DNA正好配对，所以能像“准星”一样， 将表达载体准确地带到靶基因的位置。

第三步：将表达载体导入胚胎干细胞，并与其内靶基因同源重组，完成胚胎干细胞的基因改造。

第四步：基因改造后的胚胎干细胞增殖、筛选。

请根据上述资料，回答下列问题：

（1）在把与靶基因序列同源的目的基因导入受体细胞前，应首先完成                 。

（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常是             ；若用大肠杆菌储存目的基因，则需先将其处理为             细胞。

（3）上述资料中neoR基因的作用最可能是             。

（4）获得的小鼠，通过有性生殖产生的后代是否都含该目的基因             。

 

基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。在后基因组时代，研究的重点是利用转基因动物或基因敲除的动物研究基因的功能，运用基因重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下图所示。请回答下列问题：

（1）在把目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的　　　　　　与之结合，在这一过程中所需要的工具酶是限制性内切酶和　　　　　　       　。

（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则一般是通过病毒感染或显微注射技术将目的基因导入受体细胞，选择的受体细胞应该是                   。

（3）在此类基因操作中，通常可以用水母的发光蛋白作为标记物。水母发光蛋白有发光环，能在一定条件下发出荧光，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是（    ）

A．促使目的基因导入受体细胞中     B．促使目的基因在寄主细胞中复制

C．使目的基因的转移容易被检测出来 D．使目的基因容易表达成功

（4）按上述操作获得的转基因小鼠是杂合子，如果想获得一个目的基因纯合的个体，以研究该种动物体内靶基因的功能，应该如何进行下一步实验？                                  

                                                                                 

 

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