题目内容
2007年诺贝尔生理学或医学奖授予在“基因靶向”技术方面做出突出贡献的三位科学家。“基因靶向”技术，指的是应用DNA同源重组原理，通过一定的载体，用设计好的目的基因替代靶基因，从而达到使靶基因功能丧失的目的。借助这一技术，科学家可以用小鼠进行实验，使其体内的某项特定基因丧失功能，以帮助人们找到治疗疾病的有效方法。下面是该实验的基本过程，请回答有关问题。
（1）获得胚胎干细胞（ES细胞）。实验一般采用ES细胞作为目的基因的受体细胞，这是因为ES细胞具有发育的___________。举出一例获取Es细胞的常用方法：_____________。
（2）获取目的基因。
①目的基因是靶基因的同源片段。经过修饰使靶基因的功能改变或丧失，就可获得目的基因。如果要获得活性降低了的x酶蛋白的目的基因，可以采用蛋白质工程技术，请简述其过程。
②为了提高实验成功率，需要通过PCR技术获得目的基因的大量拷贝。与体内DNA复制相比，PCR反应体系需加入哪两种特别的物质?
（3）构建基因表达载体。质粒是具有自我复制能力的双链环状DNA，它所具有的一至多个______________位点，使目的基因插入其中成为可能，因此常被选作运载体。
（4）将基因表达载体导入ES细胞，从中筛选出成功发生了同源重组的ES细胞，然后培育出小鼠。
①由ES细胞培育出小鼠的过程中，需要采用哪些技术手段?
②通过检测目的基因是否表达出蛋白质产品，可以确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组。请简述这种检测方法。
（1）全能性 从早期胚胎（囊胚内细胞团）中分离；从胎儿的原始性腺中分离；通过核移植技术培育得到（任答一例）
（2）①x酶蛋白的功能分析；x酶蛋白的三维结构预测和设计；x酶多肽的氨基酸序列设计；x酶基因的改造。（2分）
②两种引物、耐热的DNA聚合酶（Taq DNA聚合酶） （2分）
（3）限制酶切割
（4）①早期胚胎培养技术和胚胎移植技术（2分）
②提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原一抗体杂交。
