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下图表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，SmaⅠ是一种限制性核酸内切酶，它识别的碱基序列和酶切位点是CCC^↓GGG。若图中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，则基因D就突变为基因d。现从杂合子中分离出如图的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，则产物中不同长度的DNA片段共有几种？（）

A．2 B．3 C．4 D．5

【答案】

【解析】

试题分析：D基因含有两个SmaⅠ的切割位点，被切成三段，d基因由于有一个碱基对发生突变，留下一个切割位点，基因被切成两段，则产物中不同长度的DNA片段共有5种

考点：本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。

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苏云金杆菌是一种对昆虫有毒害作用的细菌,其杀虫活性物质主要是一类伴孢晶体蛋白。伴孢晶体蛋白经昆虫肠液消化成毒性肽,并因此导致昆虫死亡。自从培育转基因植物抗虫棉成功后，研究人员又试图将抗虫基因导入水稻细胞中，从而培养出转基因抗虫水稻。研究人员从相关生物体内提取出的部分物质或结构如下图所示：图1表示含有目的基因（抗虫基因）的DWA片段长度(bp为碱基对）和部分碱基序列，图2表示作为运载体的一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp I,BamH I,Mbo I ，Sma I 4种限制性核酸内切酶，它们所识别的碱基序列和酶切位点（用“↓”表示）分别为C ↓CGG；G ↓ GATCC；n↓ GATC；CCC ↓ GGG。请回答下列问题：

(1)若用限制酶Sma I完全切割图1中所示DNA片段，则其产物有______种，长度分别为______。

(2)若将图2中质粒和目的基因通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______。

(3 )在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的水稻细胞，需配置相应培养基，其中添加的碳源是______，目的是提供营养和______。另外，培养基中除了含有必要营养物质、琼脂和激素外，一般还需要添加______(抗生素A/抗生素B)，该培养基从用途上看属于______培养基。

(4)在培养过程中，除必要的温度、光照和氧气等外界条件外，成功的另一个关键是操作过程必须保证无菌，镊子等器械及培养基都可使用的灭菌方法是______。

下图表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，SmaⅠ是一种限制性核酸内切酶，它识别的碱基序列和酶切位点是CCC^↓GGG。若图中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，则基因D就突变为基因d。现从杂合子中分离出如图的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，则产物中不同长度的DNA片段共有几种？

A.
2
B.
3
C.
4
D.
5

根据模拟制作重组DNA分子的活动，甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRⅠ酶切后，即可获得所需的目的基因和质粒，回答以下问题：(已知EcoRⅠ酶识别序列为GAATTC，识别位点为G||A)
绿色硬纸板(甲DNA分子)的碱基序列为：
……ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC……
……TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG……
红色硬纸板(乙DNA分子)的碱基序列为：
……TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC……
……AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG……
(1)其中，DNA分子________表示含有“目的基因”，DNA分子________表示是“质粒”。用剪刀代表进行切割。酶切位点在(在下图的a处还是b处)，此化学键称为____________。
(2)请用“||”在上面的甲、乙两DNA分子上标出EcoRⅠ的作用位点。

回答有关生物技术的问题。

I、抗体的制备经历了细胞学层面和分子学层面两种合成途径的研究。下列是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。

（1）在获取抗体之前，需要向健康人体注射特定抗原（如乙肝疫苗），并且每隔一周重复注射一次。免疫学称细胞A为，该细胞在人体主要介导免疫。

（2）过程①至②抗体的获取称为　　　，其中①是　　　过程，Y细胞称为。

II、上图中，结构甲的建构可用下图1和2表示。图1表示含有目的基因的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为下表所示。

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmaⅠ
识别序列及切割位点

（3）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为。

（4）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有

种不同长度的DNA片段。

（5）上述结构中的建构过程可知，在限制酶作用下得到的产物有多种，生产上多采用

技术来降低目的基因分离提取的难度，也有利于限制酶的回收和再利用。

（6）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行拼接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是。在导入重组质粒后，为了筛选出含有重组质粒的大肠杆菌，一般需要添加的（固体/液体）培养基进行培养。在培养前，培养基必须先经过灭菌，所用的方法是；采用的方法接种以获得单菌落后继续筛选。

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