题目内容

【题目】艾滋病在吸食毒品的人群中高发,为探究冰毒(一种毒品)对HIV的影响,科研人员将X溶剂配置的三种不同浓度的冰毒分别加入到T细胞培养液中,再向培养液加入HIV,实验结果如如图所示。

1)实验中应设置对照组,具体如何操作?__________________

2)纳洛酮的化学结构与冰毒相似,可用于冰毒成瘾的临床治疗。科研人员进一步研究了纳洛酮对HIV增殖的影响,将不同试剂分别加入到被HIV感染的T细胞培养液中,定期检测HIV的含量(10-3gmL),结果如下表。

组别

3

4

5

6

冰毒组

5. 59

31. 73

81. 77

243.0

冰毒和纳洛酮组

1.96

8. 11

15.36

41.23

纳洛酮组

1.94

8. 10

15.81

42. 30

对照组

1. 93

8. 13

15.79

41.81

①实验中使用的冰毒浓度应为______________

②由实验结果表明,纳洛酮_________ (填促进/抑制/不影响/HIV的增殖,能_______(填加强/阻滞)冰毒对HIV增殖的影响。

【答案】对照组将等量的不含冰毒的溶剂加入到T细胞培养液中,再向培养液中加入HIV 不影响 阻滞

【解析】

本题的自变量是不同浓度的冰毒和感染HIV的时间,因变量是实验组HIV的数量比对照组增加的倍数。随着感染天数的增加,各实验组HIV的数量比对照组增加的倍数均有所增加。

1)实验的自变量是不同浓度的冰毒,由于病毒是用X溶剂配置的,故对照组应该将等量的不含冰毒的X溶剂加入到T细胞培养液中,再向培养液中加入HIV,以排除X溶剂对实验结果的影响。

2)①根据冰毒组相应天数HIV的数量与对照组HIV数量的关系可知,该实验中使用的冰毒浓度应为10-10mol/L

②根据表格数据可知,纳洛酮组合对照组的HIV含量几乎一致,说明纳洛酮不影响HIV的增殖,另外冰毒组和冰毒和纳洛酮组对照可知,加入纳洛酮会抑制冰毒对HIV增殖的促进作用。

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【题目】乳糖酶是一种生物酶制剂,主要用来治疗乳糖不耐受症。研究人员利用基因工程技术,将人工优化的米曲霉乳糖酶基因(lacA)导入乳酸克鲁维酵母细胞,获得了高效表达乳糖酶的重组菌株。下图1为载体PKLACl的限制酶切图谱(总长度为9091bpbp表示碱基对;XhoⅠ、BglⅡ、SacⅡ表示限制酶,数字代表碱基的编号),amdS基因编码的乙酰胺酶能够将乙酰胺降解成氨,只有转化成功的乳酸克鲁维酵母才能在乙酰胺作为唯一氮源的培养基中生长。图2为含有lacADNA片段。

请回答下列问题:

1)米曲霉合成并分泌至胞外的乳糖酶能将乳糖分解为________

2)优化后的米曲霉乳糖酶基因片段lacAG-C碱基含量由原来的51.4%降低到39.2%,使乳酸克鲁维酵母偏爱的密码子出现的频率大幅度增加,从而在不改变乳糖酶________序列的前提下,提高了重组菌株该基因表达中________(填具体步骤)的效率。

3)将优化的米曲霉乳糖酶基因片段lacApKLACl分别使用用XhoⅠ、BelⅡ双酶切,然后用________连接,得到含目的基因的重组质粒(pKLAC1lacA,长度为12040bp)。若目的基因置换了pKLACl中一段长33bp的片段,则目的基因的长度为________bp.

4)用小剂量质粒提取试剂盒提取重组质粒,对所提取的重组质粒用SacⅡ单酶切后纯化,纯化产物用1%琼脂凝胶进行电泳检测。若结果如图3中的第________(填序号)泳道所示,则说明优化后的目的基因片段lacA成功构建在质粒pKLACl中。

5)将重组质粒pKLACl-lacASacⅡ单酶切使其线性化,纯化后与感受态乳酸克鲁维酵母细胞混合、转化。用________适当稀释细胞液,均匀地涂布于________平板上进行培养,富集并筛选重组菌株。将筛选出的重组菌株进行发酵培养120h,检测________,最终获得高效表达乳糖酶的重组菌株。

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