Question

12．多不饱和脂肪酸需要从膳食中摄取，而不能被人体直接合成．科学家通过转基因手段将w-6脂肪酸脱氢酶基因（FAT1）整合到肉牛基因组，以期提高肉牛体内的多不饱和脂肪酸含量，促进人体健康．请回答下列问题：
（1）将w-6脂肪酸脱氢酶基因（FAT1）导入到肉牛细胞中常用的方法是显微注射法，在用PCR技术扩增目的基因时，需要的条件除扩增缓冲液、模板DNA、4种原料和能量外，还需要引物和Taq酶．
（2）构建好的基因表达载体主要包括复制原点、启动子、目的基因、终止子和标记基因，其中启动子功能是RNA聚合酶识别和结合位点，驱动基因转录出mRNA．
（3）哺乳动物的脂肪细胞来源于前脂肪细胞，脂肪组织体积增大是前脂肪细胞分裂和分化和脂肪细胞的生长结果．
（4）在体外培养前脂肪细胞，需过滤脂肪组织血管基质，并经胰蛋白酶消化而得到单个前脂肪细胞，进行原代培养．体外培养细胞的操作及培养过程均需要在无菌条件下进行．成熟组织细胞间质少、细胞松散，所以随着前脂肪细胞的分化，细胞贴壁生长性能下降．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
4、目的基因的检测与鉴定：
（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）将目的基因导入动物细胞常用显微注射法；在用PCR技术扩增目的基因时，需要的条件主要有扩增缓冲液、模板DNA、4种原料、特定引物和Taq酶（或热稳定DNA聚合酶）．
（2）构建好的基因表达载体主要包括复制原点、启动子、目的基因、终止子和标记基因，其中启动子功能是RNA聚合酶识别和结合位点，驱动基因转录出mRNA．
（3）哺乳动物的脂肪细胞来源于前脂肪细胞，脂肪组织体积增大是前脂肪细胞分裂和分化和脂肪细胞的生长结果．
（4）在体外培养前脂肪细胞，需过滤脂肪组织血管基质，并经胰蛋白酶消化而得到单个前脂肪细胞，进行原代培养．体外培养细胞的操作及培养过程均需要在无菌条件下进行．成熟组织细胞间质少、细胞松散，所以随着前脂肪细胞的分化，细胞贴壁生长性能下降．
故答案为：
（1）显微注射法         引物和Taq酶
（2）RNA聚合酶识别和结合位点，驱动基因转录出mRNA
（3）分裂和分化      生长
（4）胰蛋白酶         无菌       下降

点评 本题考查基因工程、植物组织培养等知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具、操作步骤等知识，识记动物细胞培养的过程，再结合所学的知识答题．