Question

3．人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的利用价值．为了增强发酵效果，研究人员拟从牛胃中筛选出纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行研究．请回答下列问题：
（1）在样品稀释和接种的步骤中，下列选项不需要的是B．
A．酒精灯    B．显微镜    C．培养皿    D．无菌水
（2）为了培养上述菌株，选择的培养基配方是BCEFG．
A．葡萄糖    B．纤维素    C．氮源    D．纤维素酶    E．琼脂    F．无机盐    G．蒸馏水
（3）为确定得到的纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种．
（4）纯化微生物培养时，可采用两种接种方法．如图为接种后微生物培养的效果图，那么获得图A效果的接种方法是稀释涂布平板法，进行该操作时，滴加到培养基表明的菌悬液量不宜过多的原因是培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果．图B效果的接种方法是平板划线法．

（5）在纯化菌种时，所用的培养基都需要在接种前用高压蒸汽灭菌法进行灭菌．将10⁴倍的稀释液分别涂布到4个平板上培养，每个平板均接种了0.1mL样品．平板的菌落数分别是210、230、470、190，则样品中菌种的数量为2.1×10⁷个/mL．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法
 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌．
（2）间接计数法（活菌计数法）
 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌．
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性．
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数．
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数．

解答 解：（1）为了防止杂菌污染，接种步骤需要在酒精灯的火焰旁进行，A错误；
B、样品稀释和接种步骤都不需要使用显微镜，B正确；
C、接种步骤中需要用培养皿，C错误；
D、稀释时需要用无菌水，D错误，
故选：B．
（2）分离获得产纤维素酶菌需要使用选择培养基，该培养基为固体培养基，其中必须添加琼脂．该培养基应该以纤维素（秸杆）作为唯一碳源，因此不需要加葡萄糖，另外还需要加入氮源、无菌水、无机盐、生长因子，故选：BCEFG．
（3）为确定得到的纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验．
（4）纯化微生物培养时，可采用两种接种方法，即稀释涂布平板法和平板划线法．图中A采用的稀释涂布平板法，进行该操作时，滴加到培养基表明的菌悬液量不宜过多，原因是培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果．图B采用的平板划线法．
（5）对培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌法．将10⁴倍的稀释液分别涂布到4个平板上培养，每个平板均接种了0.1mL样品．平板的菌落数分别是210、230、470、190，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，则样品中菌种的数量为$\frac{210+230+190}{3}$×$\frac{1}{0.1}$×10⁴=2.1×10⁷个/mL．
故答案为：
（1）B
（2）BCEFG
（3）发酵产纤维素酶
（4）稀释涂布平板法   培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果   平板划线法
（5）高压蒸汽灭菌      2.1×10⁷

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记几种微生物常用的两种方法；识记培养基的组成成分、种类及功能；识记计数微生物常用的方法及注意事项，能结合所学的知识准确答题．