Question

13．转基因猪在异种器官移植、生物反应器和疾病模型等方面有广泛应用．下图为转基因猪的培育过程，请分析回答：

（1）体外培养猪胎儿成纤维细胞，需定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成伤害．当细胞贴满瓶壁时，可分瓶进行传代培养，让其继续增殖．通常选用10代以内的细胞进行核移植，目的是保持细胞正常的二倍体核型．
（2）为便于检测与筛选，用红色荧光蛋白基因作为标记基因参与构建基因表达载体，将其导入猪胎儿成纤维细胞中，筛选发红色荧光的细胞与MⅡ中期的去核卵母细胞融合，使供体核进入受体卵母细胞，利用物理或化学的方法激活重组细胞，使其完成细胞分裂和发育进程形成重组胚胎．采用机械方法进行胚胎分割使代孕猪产下同卵双胎或多胎．
（3）与成年动物细胞相比，用胚胎细胞克隆动物的成功率较高，原因是胚胎细胞的分化程度低于成年动物的体细胞，恢复其全能性相对容易．

Answer 1

分析 1、分析题图：图示表示绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程，其中涉及①将目的基因导入受体细胞的过程；②卵母细胞的采集；③核移植过程；④早期胚胎培养过程；⑤胚胎移植．
2、动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养．
3、动物核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎．在体外将采集到的卵母细胞培养到减数第二次分裂中期才成熟，可以通过显微操作技术去除卵母细胞的细胞核和第一极体，核移植时，对提供细胞核和细胞质的奶牛不需要进行同期发情处理，使用电脉冲等方法可以激活重组细胞使其完成细胞分裂和发育．

解答 解：（1）体外动物细胞培养，需要定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成伤害．因为细胞具有接触抑制现象，当细胞贴满瓶壁时，可分瓶进行传代培养，让其继续增殖．通常选用10代以内的细胞进行核移植，目的是保持细胞正常的二倍体核型．
（2）为便于检测与筛选，用红色荧光蛋白基因作为标记基因参与构建基因表达载体，将其导入猪胎儿成纤维细胞中，核移植中做受体的一般是处于减数第二次分裂中期的卵母细胞，故筛选发红色荧光的细胞与MⅡ中期的去核卵母细胞融合，使供体核进入受体卵母细胞，利用物理或化学的方法激活重组细胞，使其完成细胞分裂和发育进程形成重组胚胎．采用机械方法进行胚胎分割使代孕猪产下同卵双胎或多胎．
（3）与成年动物细胞相比，用胚胎细胞克隆动物的成功率较高，原因是胚胎细胞的分化程度低于成年动物的体细胞，恢复其全能性相对容易．
故答案为：
（1）细胞代谢产物积累    传代    二倍体核型
（2）标记    MⅡ中      细胞分裂和发育进程    胚胎分割
（3）胚胎细胞的分化程度低于成年动物的体细胞，恢复其全能性相对容易

点评 本题考查了动物细胞培养的条件及动物的基因工程和胚胎工程，属于中档题．