Question

(13分)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：


(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。
(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越__________。
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是____________________________________________________________________。
(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_____________________________________________________________________
(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入_______酶。
(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了______________________________________
(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在____________________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
（8）cDNA探针是目前应用最为广泛的一种探针。制备cDNA探针时，首先需提取、分离获得__________作为模板，在__________的催化下合成cDNA探针
（9）基因工程中利用乳腺生物反应器生产-抗胰蛋白酶，应选用__________切割含有目的基因的DNA片段和载体，并用__________方法导入__________中，再利用SRY探针 （Y染色体上的性别决定基因）进行检测，将检测反应呈__________（选填“阳”、“阴”）性的胚胎进行移植培养。

Answer 1

(1)0、2　      (2)高
(3)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因　
(4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化　
(5)DNA连接　
(6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞　
(7)蔗糖为唯一含碳营养物质
(8) mRNA 逆转录酶
(9) 同种限制酶   显微注射   受精卵   阴性

解析试题分析：（1）环形质粒经经SmaⅠ切割前后得到1个现行DNA,含2个游离的磷酸基团。（2）由SmaⅠ酶的识别序列可知质粒上SmaⅠ酶的切割位点越多，说明该质粒中的氢键数量越多，结构越稳定。（3）该质粒中只有1个标记基因，所以用SmaⅠ酶切割会破坏该标记基因及目的基因。（4）与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化。（5）切割后目的基因和质粒连接需要DNA连接酶。（6）标记基因（抗性基因）的作用：鉴别和筛选含有目的基因的细胞。（7）受体——大肠杆菌失去了吸收蔗糖的能力，因此可以用含蔗糖的培养基筛选出含重组质粒的的大肠杆菌。（8）以mRNA为模板在逆转录酶的作用可合成单链DNA。（9）用同一种限制酶切割产生的黏性末端相同；受体细胞为受精卵，导入目的基因的方法是显微注射法。利用乳腺生物反应器生产产品，可知该转基因动物必须为雌性，雌性体内不含Y染色体。
考点：本题考查基因工程知识，意在考查运用所学知识与观点结合图示信息，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论。