Question

【生物--选修3现代生物科技专题】
为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片断大小．下表是某小组进行的相关实验．

已知一线性DNA序列共有5000bp（bp为碱基对）	第一步水解	产物 （单位bp）	第二步水解	产物 （单位bp）
	A酶切割	2100	将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割	1900   200
		1400		800    600
		1000		1000
		500		500
	B酶切割	2500	将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割	1900   600
		1300		800    500
		1200		1000   200
	经A酶和B酶同时切割	1900    1000    800    600    500    200

（1）由上表可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为

 

个和

 

个．
（2）根据表中数据，请在图1中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片断的大小

（3）巳知BamHI与BglII的识别序列及切割位点如图2所示．用这两种限制酶完全切割相应的DNA片段时．产生的末端是

 

末端．现用这两种酶和DNA连接酶对若干段同种DNA分子（含有BamHI与BglII的识别序列各一个）进行反复的切割（完全切割）、连接操作，若干循环．一段时间后反应液中会出现多种核苷酸片段，其中能够连接且不被BamHI与BglII切割的序列是

 

、

 

．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：限制性核酸内切酶是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，简称限制酶．由表格分析可知A酶切割后有4段产物，说明酶A有3个切割位点；B酶切割后有3段产物，说明酶B有2个切割位点．限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA两条链分别切开时，产生的是黏性末端；限制酶在它识别序列的中心轴线将DNA切开时，产生的是平末端．

解答： 解：（1）A酶切割后形成4段，所以有3个识别位点，B酶切割后形成3段，所以有2个切割位点．
（2）由表中酶切割后片段长度可知，1900+600=2500，800+500=1300，1000+200=1200，所以连接如图所示．

（3）巳知BamHI与BglII的识别序列及切割位点如图2所示．用这两种限制酶完全切割相应的DNA片段时．限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA两条链分别切开，故产生的末端是黏性末端．现用这两种酶和DNA连接酶对若干段同种DNA分子（含有BamHI与BglII的识别序列各一个）进行反复的切割（完全切割）、连接操作，若干循环．一段时间后反应液中会出现多种核苷酸片段，其中能够连接且不被BamHI与BglII切割的序列是、．
故答案为：
（1）3           2     
（2）

（3）黏性         

点评：本题意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力．要注意，获取目的基因和切割载体时使用同种限制酶，目的是产生相同的黏性末端．获取一个目的基因需限制酶剪切两次，共产生 4个黏性末端或平末端．限制酶切割位点的选择必须保证标记基因的完整性，以便于检测．