Question

14．长期以来，香蕉生产遭受病害的严重威胁，制约了其发展．目前，随着转基因抗病香蕉基因工程技术的日趋成熟，为培育抗病香蕉品种开辟了新途径．转基因抗病香蕉的培育过程如图所示，质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点．请回答：

（1）构建含抗病基因的PstⅠ表达载体A时，应选用EcoRⅠ限制酶，对含抗病基因的DNA和质粒进行切割．
（2）培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有抗卡那霉素基因，作为标记基因．
（3）能使抗病基因在香蕉细胞中特异性表达的位于基因首端的调控序列是：A（填字母序号）．
A启动子   B终止子  C 复制原点   D标记基因
（4）欲检测目的基因是否表达成功，可采用的技术C（填字母序号）．
A．核酸分子杂交      B．基因序列分析    C．抗原-抗体杂交   D．PCR．

Answer 1

分析 根据题意和图示分析可知：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点，其中SmaⅠ酶的切割位点位于抗病基因（目的基因）上；质粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位点．所以要活动重组质粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ进行切割．①表示脱分化过程、②表示再分化过程．

解答 解：（1）含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点，但限制酶SmaⅠ的切割位点位于抗病基因上，对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构，所以要获得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割．要获得含抗病基因的重组质粒，应选用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶切割质粒和含目的基因的外源DNA分子．
（2）欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有抗卡那霉素基因，作为标记基因．
（3）启动子和终止子能启动目的基因的转录与终止，是使抗病基因在香蕉细胞中特异性表达的调控序列．
（4）检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，采用DNA分子杂交技术；检测目的基因是否转录出了mRNA，采用分子杂交技术；检测目的基因是否表达成功产生相应的蛋白质，采用抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）PstⅠEcoRⅠ质粒
（2）抗卡那霉素基因
（3）A 
（4）C

点评 本题结合转基因抗病香蕉的培育过程图，考查基因工程和植物组织培养技术的相关知识，要求考生识记基因工程的具体操作步骤；识记植物组织培养的原理和过程，能准确判断图中各过程的名称，再结合所学的知识准确答题．