Question

16．测定水样是否符合饮用水的卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的总数．大肠杆菌在含有伊红美蓝的固体培养基（EMB培养基）上长出的菌落呈黑色．如图所示，滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到EMB培养基上培养→统计菌落数目．据图回答问题．

（1）过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中需要经过灭菌处理的是滤杯、滤膜和滤瓶．与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行．
（2）待测水样过滤完之后，还有部分细菌吸附在滤杯杯壁上，将这部分细菌也尽可能集中到滤膜上的操作为无菌条件下，用无菌水冲洗滤杯，再次过滤．
（3）将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的接种操作．从功能上看，EMB培养基属于鉴别培养基．
（4）无菌操作下将90ml无菌水加入到10ml待测水样中，这样就将待测水样稀释了10倍，将稀释后的菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数为45，黑色菌落为5，则1升待测水样中的大肠杆菌数目为500个．
（5）若要测定待测水样中酵母菌的数目，应更换上述过滤装置中的滤膜，选择孔径更大（填“更大”或“更小”）的滤膜．

Answer 1

分析 滤膜法是检测水样中大肠细菌群的方法．将一定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴于伊红美蓝培养基上，经培养后计数和鉴定滤膜上生长的大肠菌群菌落，依据过滤水样计算每升或每100毫升水样中的大肠菌群数．操作简单、快速，主要适用于杂质较少的水样．

解答 解：（1）过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，这些实验仪器都需要经过灭菌处理，与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌的污染．
（2）待测水样过滤完之后，还有部分细菌吸附在滤杯杯壁上，此时可以在无菌条件下，用无菌水冲洗滤杯，再次过滤，将这部分细菌也尽可能集中到滤膜上．
（3）将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，属于微生物培养中的接种操作．从功能上看，该培养基中含有伊红美蓝，因此EMB培养基属于鉴别培养基．
（4）无菌操作下将90ml无菌水加入到10ml待测水样中，这样就将待测水样稀释了10倍；根据大肠杆菌鉴定的原理可知，黑色菌落为大肠杆菌，因此1升待测水样中的大肠杆菌数目=5×（1000÷10）=500个．
（5）若要测定待测水样中酵母菌的数目，酵母菌属于真核生物，大肠杆菌属于原核生物，真核细胞的直径比原核细胞大，因此应更换上述过滤装置中的滤膜，选择孔径更大的滤膜．
故答案为：
（1）滤杯、滤膜和滤瓶
（2）无菌条件下用无菌水冲洗滤杯，再次过滤
（3）接种        鉴别
（4）10   500
（5）更大

点评 本题以实验流程图为载体，考查了微生物的分离与计数的有关知识，要求考生掌握滤膜法的原理和步骤，掌握无菌技术的主要内容，识记大肠杆菌鉴定的方法等，结合题干信息准确答题．