Question

9．幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰氏阴性螺旋状杆菌，细胞内具有强的脲酶（能降解尿素）活性，其代谢类型属于异养厌氧型，这种细菌是慢性胃炎、甚至胃癌发生的元凶．
（1）为了对胃炎患者的胃粘膜提取物稀释样液中的幽门螺杆菌进行分离，应将样品稀释液接种于以尿素为唯一氮源的固体选择培养基上．
（2）分离培养幽门螺杆菌是必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，培养皿常用的灭菌方法是干热灭菌．采用高压蒸汽灭菌法要达到良好的灭菌效果，一般需在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15-30分钟．
（3）欲检测上述培养基中是否具有幽门螺杆菌这类细菌的存在，向培养基中添加酚红指示剂，培养基中菌落周围显示红色环带，既表明这类细菌的存在，这种检测过程的原理是脲酶将培养基中的尿素分解成氨，导致培养基pH升高，使酚红指示剂呈现红色．
（4）采用液体培养基培养幽门螺杆菌，为了测定菌液中的菌体数量，一般采用稀释涂布平板法将一定量的菌液接种到固体培养基上，统计菌落的数量来代表菌体数，这种检测方法测得的结果一般偏小（填“大”或“小”），原因是有些活菌在培养过程中死亡、有些菌落是由多个活菌共同形成的．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、无菌技术：消毒和灭菌

	消毒	灭菌
概念	使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法	灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象	操作空间、某些液体、双手等	接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

解答 解：（1）为了分离具有强的脲酶（能降解尿素）的幽门螺杆菌，应将样品稀释液接种于以尿素为唯一氮源的固体选择培养基上．
（2）对培养皿灭菌常用干热灭菌法；采用高压蒸汽灭菌法要达到良好的灭菌效果，一般需在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15-30分钟．
（3）欲检测上述培养基中是否具有幽门螺杆菌这类细菌的存在，向培养基中添加酚红指示剂，培养基中菌落周围显示红色环带，既表明这类细菌的存在，这种检测过程的原理是脲酶将培养基中的尿素分解成氨，导致培养基pH升高，使酚红指示剂呈现红色．
（4）接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可以对微生物进行计数；采用这种方法计数时，统计菌落的数量来代表菌体数；由于有些活菌在培养过程中死亡、有些菌落是由多个活菌共同形成的，因此这种检测方法测得的结果一般偏小．
故答案为：
（1）尿素
（2）干热灭菌      100       121
（3）脲酶将培养基中的尿素分解成氨，导致培养基pH升高，使酚红指示剂呈现红色
（4）稀释涂布平板   菌落    小    有些活菌在培养过程中死亡、有些菌落是由多个活菌共同形成的

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记接种微生物常用的方法，掌握无菌技术，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．